[發(fā)明專利]一種油菜葉片脯氨酸含量快速檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010219036.0
• 申請日: 2010-07-05
• 公開（公告）號: CN101900679A
• 公開（公告）日: 2010-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何勇;劉飛;孔汶汶
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: G01N21/49
• 分類號: G01N21/49;G01N21/35
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及油菜檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種油菜葉片脯氨酸含量快速檢測方法。

背景技術(shù)

油菜是我國主要的油料作物和蜜源作物之一，油菜的種植面積占全國油料作物總面積的40％以上，產(chǎn)量占全國食用植物油總產(chǎn)量的60％以上，居世界首位。油菜不同時期的生長狀況關(guān)系到油菜籽的產(chǎn)量和質(zhì)量。油菜葉片中的氨基酸含量是油菜生長過程中一項非常重要的生理指標，對油菜葉片生理和有機物積累等生理過程有重要意義。因此可以通過檢測油菜葉片中的氨基酸含量，得到油菜的生長狀況。近年來，由于農(nóng)村勞動力的減少，油菜種植中使用了大量的除草劑。有些除草劑是一種生長抑制劑，例如丙酯草醚，可以阻止直鏈氨基酸的生物合成，具有對油菜安全、殺草譜較廣、除草活性高、持效期長，且低毒、低殘留，與環(huán)境相容等特點。當(dāng)油菜處于逆境脅迫下，由植物體內(nèi)脯氨酸生物合成激活和脯氨酸降解的抑制共同導(dǎo)致的脯氨酸的積累，并且在逆境壓力解除后迅速被分解利用。普遍認為，逆境脅迫下脯氨酸大量積累可能對植物在壓力解除后的恢復(fù)有很大幫助，因為脯氨酸可以作為碳源和氮源，并且能夠為細胞恢復(fù)提供大量的能量。因此，其含量可以作為植物抗逆性的生理指標之一，脯氨酸量高，植物抗性強。對油菜葉片中脯氨酸含量的檢測，可以反映出某些除草劑對油菜生理和逆境脅迫的影響，對實現(xiàn)油菜生長狀況的大田檢測和連續(xù)監(jiān)測，提高油菜籽的產(chǎn)量和質(zhì)量有重要意義。

傳統(tǒng)的油菜葉片脯氨酸含量檢測方法是根據(jù)GB/T5009.124-2003，采用萬分之一天平準確稱取粉樣0.05g置于10ml體積的安培瓶中，加入5ml6M?HCL，用循環(huán)真空泵抽真空并在酒精噴燈上封口后置于110℃烘箱中消解24h；將冷卻后的消解液完全轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中定容、搖勻；吸取5ml上清液置于圓底磨口錐形瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上(60～70℃)抽真空15min左右蒸干鹽酸；重新加入0.02M?HCl(pH?2.2)10ml，超聲波充分溶解后用一次性針筒吸出，經(jīng)0.22μm的一次性濾頭過濾至氨基酸分析專用樣品瓶中，4℃黑暗保存，用日立L-8900自動氨基酸分析儀(日本)分析測定脯氨酸含量。該方法樣本預(yù)處理過程和測量過程費時、費力、化學(xué)消耗品昂貴，且對環(huán)境造成一定污染。因此，急需研究一種簡單、快速、無損的油菜葉片脯氨酸含量檢測方法和技術(shù)。

可見/近紅外光譜可以反映物質(zhì)內(nèi)部的有機成分，特別是C-H、O-H、N-H等基團的倍頻和合頻吸收，可用于定量測定物質(zhì)有機物質(zhì)的含量。光譜技術(shù)已廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、食品、石油化工、制藥、飼料等行業(yè)。在植物生命信息快速檢測研究中具有廣泛的應(yīng)用潛力

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種油菜葉片脯氨酸含量快速檢測方法，解決了現(xiàn)有檢測方法費時、費力、操作復(fù)雜、污染環(huán)境等問題。

一種油菜葉片脯氨酸含量快速檢測方法，包括以下步驟：

(1)將油菜葉片殺青、烘干后粉碎，得到葉片粉末；

(2)分別采集波長2308nm、1444nm、1418nm、1994nm、2432nm、2366nm、2020nm、1100nm、1942nm、2058nm、1338nm、1730nm、2294nm和2186nm光波所對應(yīng)的油菜葉片的反射率；

(3)將各反射率分別代入多元線性回歸方程：y＝-151770λ₁-179.233λ₂-156.080λ₃+90.881λ₄-61.178λ₅-85.245λ₆-97.499λ₇+14.884λ₈-47.067λ₉+39.998λ₁₀-35.203λ₁₁-1.957λ₁₂-7.455λ₁₃+60.409λ₁₄+1.8470，計算油菜葉片中脯氨酸含量；

方程中y為油菜葉片脯氨酸含量，單位為mg/100mg?DW；λ₁～λ₁₄分別為波長2308nm、1444nm、1418nm、1994nm、2432nm、2366nm、2020nm、1100nm、1942nm、2058nm、1338nm、1730nm、2294nm和2186nm光波所對應(yīng)的油菜葉片粉末樣本的反射率。