[發明專利]用于杏褪綠卷葉植原體實時熒光PCR檢測的引物、探針及其方法

無效

• 申請號: 201010218498.0
• 申請日: 2010-07-06
• 公開（公告）號: CN101899509A
• 公開（公告）日: 2010-12-01
• 發明（設計）人: 王有福;姜麗;李鑫;劉卉秋
• 申請（專利權）人: 王有福;姜麗;李鑫;劉卉秋
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 大連星海專利事務所 21208
• 代理人: 于忠晶

1.用于杏褪綠卷葉植原體實時熒光PCR檢測的引物、探針，其特征是：含有一條特異性Cycling探針和一對引物：

（1）探針（XTLJY?Probe）：5’-(FAM)?ATTCTGACTGTA-3’

（2）引物（XTLJY?Primer-F）：5’-ACTCTGACCGAGCAACGCC?-3’

?????????（XTLJY?Primer-R）：5’-?GATAACGCTTGCCCCCTATG?-3’

其中方框內為RNA堿基。

2.根據權利要求1所述的用于杏褪綠卷葉植原體實時熒光PCR檢測的引物、探針，其特征是：其合成方法是：首先在基因庫（Genebank）中搜集全部植原體及有代表性細菌的16srDNA核酸序列，采用DNASTAR軟件進行序列比對，找出杏褪綠卷葉植原體與其他植原體的基因差異位點，設計出實時熒光PCR?循環（Cycling）?探針（XTLJY?Probe）及引物（XTLJY?Primer-F、XTLJY?Primer-R），并于生物公司合成。

3.根據權利要求1所述的用于杏褪綠卷葉植原體實時熒光PCR檢測的引物、探針，其特征是：其XTLJY?Probe特異性驗證：將杏褪綠卷葉植原體、2種以上檢疫性植原體及2種以上不同屬的細菌DNA作為模板進行XTLJY?Probe特異性驗證，PCR反應體系：

2×Cycleave???PCR?Reaction?Mix12.5?μlCycleave?Primer?Mix（10uM）1?μlCycleave?Probe（3uM）1?μlDNA1?μldH₂O9.5?μlTotal25?μl

PCR反應條件：預變性95℃?10sec；變性95℃?5sec，退火55℃?10sec，延伸72℃?15sec，45cycles；

XTLJY?Probe特異性驗證通過后，即表明該引物及探針可應用于杏褪綠卷

葉植原體的檢測。