[發明專利]產生物表面活性劑的解淀粉芽孢桿菌BZ6-1菌株及其在油泥洗脫中的應用

無效

• 申請號: 201010217803.4
• 申請日: 2010-07-06
• 公開（公告）號: CN101935633A
• 公開（公告）日: 2011-01-05
• 發明（設計）人: 劉五星;駱永明;王小兵;王殿璽
• 申請（專利權）人: 中國科學院南京土壤研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F11/02;C12R1/07
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐建清

一、技術領域

本發明屬于污染土壤修復技術領域，尤其涉及一種產生物表面活性劑的解淀粉芽孢桿菌BZ6-1菌株及其在油泥洗脫中的應用。

二、背景技術

生物表面活性劑是微生物合成的具有雙親性(分子結構中同時具有親水性和親油性基團)的一類化合物。微生物產生的生物表面活性劑包括許多不同的種類，如糖脂、脂肽、多糖-脂類復合物、磷脂、脂肪酸和中性脂等。與化學表面活性劑相比，生物表面活性劑具有降低表面張力、穩定乳化液、無毒、能生物降解等特點。

含油污泥(簡稱油泥)是在石油開采、運輸、煉制及含油污水處理過程中產生的含油固體廢物。油泥中一般含油率在10～50％，含水率在40～90％。我國石油化學行業中，平均每年約產生80萬噸罐底泥、池底泥。油泥中含有數百種有毒有害化合物，其中的有些化合物具有致畸、致癌以及致突變效應。因此，美國環保署將其中的某些物質列為優先污染物，并且對這些物質的排放有嚴格的限制，我國也將油泥列入國家危險廢物名錄。因此對沉積于污泥中的原油進行回收并減少油泥危害具有重大的經濟與社會價值。

三、發明內容

發明目的：本發明提供一種產生物表面活性劑的解淀粉芽孢桿菌BZ6-1菌株及其在油泥洗脫中的應用。利用分離得到的一株微生物產生的生物表面活性來處理含油污泥，實現回收沉積于污泥中的原油與減少油泥危害的目的。

技術方案：一株產生物表面活性劑的解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)BZ6-1菌株，該菌株已在國家知識產權局指定的保藏單位保藏，保藏日期為2009年01月22日，保藏單位名稱：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號：CGMCC?No.2892。

上述菌株在油泥洗脫中的應用，步驟包括：微生物培養：將解淀粉芽孢桿菌BZ6-1菌株接種到發酵培養基中培養，20～25℃下150～300rpm培養15～20h；生物表面活性劑的制備：上述發酵液4℃下離心去菌體，上清液調pH至2.0，出現絮狀沉淀，4℃靜置過夜，再離心收集沉淀，用pH?2.0的酸水洗滌一次，隨后將沉淀溶于NaOH溶液，使終pH值為7.0，冷凍干燥，得淺褐色疏松狀固體的生物表面活性劑粗品；提純：將粗品置CH₂Cl₂中抽提，后減壓蒸干，NaOH溶液溶解，形成多泡液體，濾紙過濾，濾液再次加HCl調pH至2.0，將得到的沉淀離心，得米黃色沉淀物，真空干燥去除殘留水分后即為表面活性劑純品；油泥洗脫：向油泥中加入占油泥質量1％的表面活性劑和占油泥質量1～2％的氯化鈉振蕩，靜置分層，完成洗脫。

上述發酵培養基配方為：檸檬酸鈉10g，MgSO₄0.2g，K₂HPO₄1.0g，KH₂PO₄1.0g，NH₄NO₃1.0g，FeSO₄0.05g，CaCl₂0.02g，蒸餾水1000mL，pH?7.2。

有益效果：使用從該微生物中提取的生物表面活性劑洗脫含油污泥，油的回收率平均為87.7％，下層泥中殘留的油含量為4.1％。而以水作為對照處理中，油的回收率平均為13.9％，下層泥中殘留的油含量為80.6％。除此之外，經過表面活性劑處理后油泥顏色也明顯變白。

四、附圖說明

圖1BZ6-1菌株革蘭氏染色的顯微照片(×1000)；

圖2BZ6-1菌株透射電鏡；

圖3m/z?1034離子峰的MS/MS/CID碎片質譜圖；

圖4m/z?1048離子峰的MS/MS/CID碎片質譜圖；

圖5m/z?1468離子峰的MS/MS/CID碎片質譜圖；

圖6m/z?1482離子峰的MS/MS/CID碎片質譜圖；

圖7m/z?1509.96離子峰的MS/MS/CID碎片質譜圖。

五、具體實施方式

以下結合實例對本發明作進一步的描述：

實施例1：

1.菌株

產生物表面活性劑菌株BZ6-1為本實驗室分離得到(已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC?No.2892)。實驗室保存于VGPA固體培養基斜面。

2.BZ6-1菌株的鑒定

培養特征及菌體形態觀察：革蘭氏陽性(G⁺)(圖1)，短桿狀，大小為(0.6-0.7)μm×(2.0-2.5)μm(圖2)，產芽孢。