[發(fā)明專利]甘氨酸的測(cè)定方法與甘氨酸測(cè)定試劑盒

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010215531.4
• 申請(qǐng)日: 2010-06-25
• 公開（公告）號(hào): CN102298046A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N21/31;C12Q1/32;C12Q1/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及食品檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及甘氨酸測(cè)定方法及其試劑盒。?

【背景技術(shù)】

甘氨酸為非人體必需氨基酸。甘氨酸有獨(dú)特的甜味，能緩和酸、堿味，掩蓋食品中添加糖精的苦味并增強(qiáng)甜味。人體若攝入甘氨酸的量過多，不僅不能被人體吸收利用，而且會(huì)打破人體對(duì)氨基酸的吸收平衡而影響其它氨基酸的吸收，導(dǎo)致營養(yǎng)失衡而影響健康。甘氨酸不能被人體利用，只能分解轉(zhuǎn)化為熱能，這樣會(huì)增加肝臟負(fù)擔(dān)。而分解產(chǎn)物中的含氮化合物要通過尿液排出體外，又會(huì)增加腎臟負(fù)擔(dān)。如果大量、長期食用這類食品，可能造成肝腎損傷。部分含乳飲料企業(yè)為提高產(chǎn)品中蛋白質(zhì)含量，在生產(chǎn)加工中違規(guī)使用甘氨酸，對(duì)青少年及兒童的正常生長發(fā)育很容易帶來不利影響。?

按照我國《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB2760規(guī)定，甘氨酸在作為食品添加劑只允許在調(diào)味劑與豆奶中使用，且最高限量為每公斤1克，但在含乳飲料中不允許使用。?

【發(fā)明內(nèi)容】

【要解決的技術(shù)問題】?

本發(fā)明的目的是提供一種甘氨酸的測(cè)定方法。?

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種甘氨酸測(cè)定試劑盒。?

[技術(shù)方案]?

本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。?

本發(fā)明的方法是一種采用間接酶循環(huán)擴(kuò)增法(Indirect?Enzymatic?RecyclingMethod)、酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)與酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)的聯(lián)用技術(shù)，利用測(cè)定還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處的吸光度變化測(cè)定甘氨酸的方法。?

本發(fā)明甘氨酸測(cè)定方法的的技術(shù)原理是根據(jù)下述氰化氫合成酶、丙酮酸合成酶、丙酮酸脫氫酶的系列催化反應(yīng)完成：?

甘氨酸+2輔酶?氰化氫合成酶?氰化氫+二氧化碳+2還原型輔酶?

二氧化碳+乙酰輔酶A+還原型鐵氧還蛋白?丙酮酸合成酶?丙酮酸?

?????????????????????????????????+輔酶A+氧化型鐵氧還蛋白氧?

丙酮酸+輔酶A+輔酶?丙酮酸脫氫酶?二氧化碳+乙酰輔酶A+?

????????????????????????????????????????還原型輔酶?

本發(fā)明的方法利用氰化氫合成酶(hydrogen?cyanide?synthase；EC?1.4.99.5)酶(偶)聯(lián)丙酮酸合成酶(pyruvate?synthase；EC?1.2.7.1)、丙酮酸脫氫酶(pyruvatedehydrogenase；EC?1.2.1.51)酶促反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測(cè)法。氰化氫合成酶、丙酮酸合成酶作為作用酶，氰化氫合成酶功能為將甘氨酸酶解產(chǎn)生二氧化碳，丙酮酸合成酶的酶促作用使二氧化碳產(chǎn)生丙酮酸；丙酮酸脫氫酶作為循環(huán)酶：丙酮酸脫氫酶再將丙酮酸再次變回二氧化碳，使二氧化碳不斷地被重復(fù)循環(huán)利用。丙酮酸脫氫酶又作為顯色酶，將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測(cè)定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的速度，這樣可以通過測(cè)量340nm處吸光度上升的速度，可以測(cè)算甘氨酸的濃度大小。?

本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。?

本發(fā)明涉及一種甘氨酸的測(cè)定方法。該甘氨酸測(cè)定方法的步驟如下：?

A、樣品準(zhǔn)備：?

A.1標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備?

將一定量的甘氨酸溶于水或緩沖液中，再將甘氨酸濃度調(diào)整到1毫摩爾/升，得到的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)樣品；

A.2待測(cè)樣品的制備?

待測(cè)液體樣品直接測(cè)試，無須預(yù)處理；將一定量的待測(cè)固體樣品像制備標(biāo)準(zhǔn)樣品一樣溶于水或緩沖液中；?

A.3空白樣品?

所述的水或緩沖液作為空白樣品，其甘氨酸濃度為0毫摩爾/升；?

B、試劑溶液的制備：?

分別移取或稱取緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、氰化氫合成酶、丙酮酸合成酶、丙酮酸脫氫酶、乙酰輔酶A、還原型鐵氧還蛋白與輔酶A，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶液，它們的濃度分別是20-500mmol/L、0.001-7mol/L、0.1-5mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-100mmol/L、1-100mmol/L與1-100mmol/L；?