[發明專利]甘氨酸的測定方法與甘氨酸測定試劑盒

無效

• 申請號: 201010215319.8
• 申請日: 2010-06-25
• 公開（公告）號: CN102298021A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/31;G01N35/00;C12Q1/527;C12Q1/52;C12Q1/32
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

【技術領域】

本發明涉及食品檢驗測定技術領域，更具體地，本發明涉及甘氨酸測定方法及其試劑盒。?

【背景技術】

甘氨酸為非人體必需氨基酸。甘氨酸有獨特的甜味，能緩和酸、堿味，掩蓋食品中添加糖精的苦味并增強甜味。人體若攝入甘氨酸的量過多，不僅不能被人體吸收利用，而且會打破人體對氨基酸的吸收平衡而影響其它氨基酸的吸收，導致營養失衡而影響健康。甘氨酸不能被人體利用，只能分解轉化為熱能，這樣會增加肝臟負擔。而分解產物中的含氮化合物要通過尿液排出體外，又會增加腎臟負擔。如果大量、長期食用這類食品，可能造成肝腎損傷。部分含乳飲料企業為提高產品中蛋白質含量，在生產加工中違規使用甘氨酸，對青少年及兒童的正常生長發育很容易帶來不利影響。?

按照我國《食品添加劑使用衛生標準》GB2760規定，甘氨酸在作為食品添加劑只允許在調味劑與豆奶中使用，且最高限量為每公斤1克，但在含乳飲料中不允許使用。?

【發明內容】

[要解決的技術問題]?

本發明的目的是提供一種甘氨酸的測定方法。?

本發明的另一個目的是提供一種甘氨酸測定試劑盒。?

[技術方案]?

本發明是通過下述技術方案實現的。?

本發明的方法是一種采用酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)與酶(偶)聯法(Couple?Reaction)的聯用技術，利用測定還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)?在340nm波長處的吸光度變化測定甘氨酸的方法。?

本發明甘氨酸測定方法的的技術原理是根據下述甘氨酸轉氨酶、谷氨酸脫羧酶、異檸檬酸脫氫酶的系列催化反應完成：?

甘氨酸+酮戊二酸??甘氨酸轉氨酶??乙醛酸+谷氨酸?

谷氨酸??谷氨酸脫羧酶??4-氨基丁酸+二氧化碳?

二氧化碳+酮戊二酸+還原型輔酶??異檸檬酸脫氫酶??異檸檬酸+輔酶?

本發明的方法利用甘氨酸轉氨酶(glycine?transaminase；EC?2.6.1.4)酶(偶)聯谷氨酸脫羧酶(glutamate?decarboxylase；EC?4.1.1.15)、異檸檬酸脫氫酶(isocitratedehydrogenase；EC?1.1.1.41；EC?1.1.1.42)酶促反應終點法。甘氨酸轉氨酶酶解甘氨酸反應產生谷氨酸，再通過(偶)聯合谷氨酸脫羧酶、異檸檬酸脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度，這樣可以通過測量340nm處吸光度下降的程度，可以測算甘氨酸的濃度大小。?

本發明是通過下述技術方案實現的。?

本發明涉及一種甘氨酸的測定方法。該甘氨酸測定方法的步驟如下：?

A、樣品準備：?

A.1標準樣品的制備?

將一定量的甘氨酸溶于水或緩沖液中，再將甘氨酸濃度調整到1毫摩爾/升，得到的溶液作為標準樣品；

A.2待測樣品的制備?

待測液體樣品直接測試，無須預處理；將一定量的待測固體樣品像制備標準樣品一樣溶于水或緩沖液中；?

A.3空白樣品?

所述的水或緩沖液作為空白樣品，其甘氨酸濃度為0毫摩爾/升；?

B、試劑溶液的制備：?

分別移取或稱取緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、甘氨酸轉氨酶、谷氨酸脫羧?酶、異檸檬酸脫氫酶與酮戊二酸，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶液，它們的濃度分別是20-500mmol/L、0.001-7mol/L、0.1-0.35mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L與1-100mmol/L；?

C、待測樣品與在步驟B)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/500進行混合，在溫度15-45℃下反應5-60分鐘，在主波長340nm與副波長405nm(如果受儀器限制可以不設副波長)下進行測定，測定其吸光度隨時間的變化；?

D、在與步驟C)同樣的條件下測定步驟A)標準樣品的吸光度隨時間的變化；?

E、在與步驟C)同樣的條件下測定在步驟A)空白樣品的吸光度隨時間的變化；?

F、數據處理?

由步驟C-E)所述測定的主波長340nm的吸光度隨時間的變化，根據下式計算得到甘氨酸的含量：?