[發明專利]一種藻藍蛋白提取物的制備和應用

無效

• 申請號: 201010214387.2
• 申請日: 2010-06-18
• 公開（公告）號: CN101891809A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發明（設計）人: 陳英杰;秦松;李富超;郭雪潔;劉少芳;董曉弟
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/14;A61K38/16;A61P35/00
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 許宗富;周秀梅

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體說是一種藻藍蛋白提取物的制備和應用。

背景技術

螺旋藻是一種食品巨型藻，其營養價值得到了廣泛報道。作為螺旋藻中的主要蛋白組成，藻藍蛋白由α、β兩種脫輔基蛋白和色基組成，在620nm具有最大吸收，在640nm具有較強的紅色熒光特性。基于水溶性好，熒光強度高和抗氧化等性能，藻藍蛋白既可以作為天然色素添加劑應用于食品和化妝品工業，同時又可以開發成熒光試劑用于醫學診斷、免疫化學及生物工程等研究領域，另外作為一種重要的生理活性成分，還可以制成藥品用于醫療保健上。目前，藻藍蛋白的制備方法主要包括離子交換層析和凝膠過濾層析。這兩種方法操作繁瑣，很難實現大規模生產。因此，在保證蛋白活性的基礎上，研發高效、經濟可以大規模制備的分離技術成為藻藍蛋白開發的關鍵。

鑒于藻藍蛋白不僅可以提供人體必需的氨基酸，而且對腫瘤細胞有較強的親和力，對多種腫瘤細胞表現出顯著的殺傷效果，其營養及藥學價值得到了廣泛報道。最近的諸多數據表明，藻藍蛋白具有抗氧化特性，并在涉及到活性氧的炎癥，動脈粥樣硬化，癌癥等多種疾病的防治中表現出良好的藥效。在十二種炎癥模型中，藻藍蛋白都表現出與劑量依存的消炎活性。利用其清除活性氧，抑制環氧酶-2活性和柱狀細胞中組氨釋放等作用。

發明內容

本發明目的在于提供一種藻藍蛋白提取物的制備和應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種藻藍蛋白提取物：將螺旋藻粉在-20℃～4℃下通過反復凍融法破碎螺旋藻細胞壁得到粗提物；用質量分數為50-60％的硫酸銨沉淀粗提液得到蛋白質粗提物；而后采用雙水相萃取純化蛋白質粗提物，并用超滲除鹽，即得藻藍蛋白提取物溶液。

所述藻藍蛋白提取物水溶液的吸光度特點為A_620/280≈3.0±0.2，A_620/650≈2.2±0.1。所述藻藍蛋白提取物為藍色粉末狀固體，略有螺旋藻腥味，易溶于水，微溶于乙醇和甲醇；其1mg/mL的水溶液在25℃時，相對黏度為1.03±0.01；在室溫、避光、干燥的條件下可長期保存。

制備方法：將螺旋藻粉在-20℃～4℃下通過反復凍融法破碎螺旋藻細胞壁得到粗提物；用質量分數為50-60％的硫酸銨沉淀粗提液得到蛋白質粗提物；而后采用雙水相萃取純化蛋白質粗提物，并用超滲除鹽，即得藻藍蛋白提取物溶液。

所述藻藍蛋白提取物溶液冷凍干燥，即得到藻藍蛋白提取物。所述雙水相萃取的水相質量組成分別為4％的PEG、15％的氯化鉀和10％的pH7.0的磷酸二氫鉀-磷酸氫二鉀水溶液組成。所述超滲除鹽采用30KDa的濾膜進行超滲除鹽。

應用：所述藻藍蛋白提取物在制備抗腫瘤藥物中的應用。

本發明所具有的優點：本發明依次采用硫酸銨沉淀、雙水相萃取和超滲除鹽，避免了傳統層析技術的弊端，可以大規模生產藻藍蛋白提取物。將所得藻藍蛋白提取物采用灌胃的方式將其對S180肉瘤小鼠進行不同劑量給藥，結果表現出良好的腫瘤抑制效果，并且對脾臟和胸腺并沒有表現出明顯的毒性。與傳統的化療藥物(環磷酰胺)相比較，其水溶性好、毒副作用低、給藥方便。

附圖說明

圖1a.為本發明實施例制備過程各樣品的紫外可見光譜表征圖。

圖1b.為本發明實施例制備藻藍蛋白提取物的熒光光譜表征圖。

圖2a.為本發明實施例制備所得藻藍蛋白提取物硫酸鋅染色紫外成像電泳表征圖。

圖2b.為本發明實施例制備所得藻藍蛋白提取物考馬斯亮藍染色成像電泳表征圖。

圖3a.為本發明實施例例制備所得藻藍蛋白提取物在4℃時不同pH值磷酸鹽溶液中的光譜穩定性圖。

圖3b.為本發明實施例例制備所得藻藍蛋白提取物在25℃時不同pH值磷酸鹽溶液中的光譜穩定性圖。

具體實施方式

藻藍蛋白提取物：

以螺旋藻藻粉為原料制備的藻藍蛋白提取物主要由藻藍蛋白組成。其水溶液的吸光度特點為A_620/280≈3.0±0.2，A_620/650≈2.2±0.1。

所述藻藍蛋白提取物為藍色粉末狀固體，略有螺旋藻腥味，易溶于水，微溶于乙醇和甲醇；其1mg/mL的水溶液在25℃時，相對黏度為1.03±0.01；在室溫、避光、干燥的條件下長期保存。

實施例1

制備：