[發明專利]使用大孔弱酸性陽離子樹脂分離提取恩拉霉素的方法

有效

• 申請號: 201010213986.2
• 申請日: 2010-06-30
• 公開（公告）號: CN102311486A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 嚴玉寶;謝晶;余華;葉健強;胡娟;廖黨金;周岷江;李江凌;曹冶;李紅;趙素君;文豪
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國四川出入境檢驗檢疫局;四川省畜牧科學研究院
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C07K1/18
• 代理公司: 成都虹橋專利事務所 51124
• 代理人: 武森濤

技術領域

本發明屬于分離技術領域，涉及一種使用大孔弱酸性陽離子樹脂分離提取恩拉霉素的方法。

背景技術

抗生素發明以來，不僅在人類疾病的治療和預防方面效果顯著，同時在畜牧業飼料添加劑方面也發揮著巨大的作用。抗生素對動物的促生長作用是在20世紀40年代后期由Stocktadt等人發現，以后相繼發現四環素類、大環內酯類、β-內酚胺類等抗生素加入飼料中，都有促進生長、增重、增產、提高飼料報酬作用。1950年美國FDA正式批準允許在飼料中添加抗生素。抗生素對于畜禽的生長和提高生產性能的作用是肯定的，而且很穩定，許多國家的畜禽業都長期應用抗生素添加劑。實踐證明，合理地使用抗生素添加劑能促進畜禽生長，提高飼料轉化率。同時也有報告顯示，不允許在飼料中添加抗生素或其他抗菌促生長劑的國家，會造成畜牧業生產成本增加，盈利減少，同時也有可能引發諸如生態環境及國家之間的貿易戰等問題。但為了避免由于抗生素的濫用引起耐藥菌株大量繁殖或使藥物在畜產品中的殘留量增大，對畜禽生長及人體健康造成直接危害，應用畜禽專用的抗生素飼料添加劑已迫在眉睫。由于恩拉霉素具有優良的促生長和改善飼料利用率的作用，因此被世界上許多國家推薦作為抗生素促生長劑。

恩拉霉素(Enramycin)，又名恩來霉素、恩霉素、安來霉素、持久霉素，是由土壤中分離出來的放線菌Streptomyces?fungicidious?NO.B5477發酵產生的一種多肽類抗生素，易溶于稀鹽酸，微溶于水、甲醇、乙醇。市場上主要的來源是先靈葆雅公司的菌絲體預混劑。

作為飼料添加劑恩拉霉素有如下優點：

1.臨床應用研究方面，與其他抗生素添加劑相比，用量少的情況下飼料系數更低，生長速度更快。2.藥效學研究方面，恩拉霉素對主要的革蘭氏陽性菌都具有強大的殺菌作用。恩拉霉素對乙肝病毒(HBV)抗原有較強的抑制作用，包括對乙肝e抗原(HBeAg)也有較好的抑制效果。恩拉霉素與臨床上現有的抗生素或抗菌藥之間不存在交叉耐藥性。敏感菌幾乎不對恩拉霉素產生耐藥性，在實驗條件下，耐藥性的產生也非常緩慢，即使出現，耐藥性也不穩定，而且極易丟失。3.藥物殘留研究方面，恩拉霉素內服極不易被吸收，藥物主要通過糞便排出體外。4.毒理學研究方面，恩拉霉素毒性很低。急性毒性實驗表明，恩拉霉素在口服、皮下或肌肉注射給藥時實際無毒。5.恩拉霉素的鹽酸鹽對熱、光照和潮濕有極好的穩定性。恩拉霉素在飼料中具有很高的穩定性，在室溫條件下長期儲藏很少降解，在制成顆粒料過程中也非常穩定，與飼料混合后在室溫下長期儲藏效價下降甚微。恩拉霉素在腸道內不被降解，能夠保持原有的抗菌活性。

抗生素的提取主要有以下幾種途徑：

有沉淀法、溶媒萃取法、吸附法、離子交換色譜法、高效液相色譜法、膜分離技術、毛細管電泳、雙水相技術、反膠束、超臨界萃取等。其中膜分離技術、毛細管電泳、雙水相技術、反膠束、超臨界萃取等為近幾年新開始應用的方法，成本高，沒有較為成熟的工業化模式，大多在實驗室小規模對個別品種進行探索。

沉淀法、溶媒萃取法、吸附法等傳統方法，由于活性炭和大多數溶媒不能很好的將雜質分離，得到的物質純度不夠，從而達不到分離提取要求的效果，目前大多應用于粗提，粗品預處理階段，配合其他方法共同應用。高效液相色譜法中，大多通過使用預柱來排除部分相關雜質，預柱常因不能再生利用而造成耗損成本比較高。目前大多數抗生素品種在分離、提取、濃縮、純化、脫色等方面廣泛應用的是色譜法。

中國發明專利申請《一種安來霉素產生菌及利用大孔樹脂提取的方法》(200910032340.1)中記載用大孔吸附樹脂安伯萊特XAD-4、安伯萊特XAD-16等來分離提取恩來霉素。大孔吸附樹脂的吸附實質為一種物體高度分散或表面分子受作用力不均等而產生的表面吸附現象，這種吸附性能是由于范德華引力或生成氫鍵的結果。同時由于大孔吸附樹脂的多孔結構使其對分子大小不同的物質具有篩選作用。通過上述這種吸附和篩選原理，有機化合物根據吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附樹脂上經一定溶劑洗脫而達到分離、純化、除雜、濃縮等不同目的。其理化性質穩定，不溶于酸、堿及有機溶劑，對有機物選擇性好，不受無機鹽類及強離子、低分子化合物存在的影響，近年來也廣泛應用于中藥、微生物的分離提取。但該發明方法對于菌絲體中恩拉霉素的產率只能控制在60％～71％，回收率較低，對于規模化工業生產耗損太多，含量檢測方面也難滿足準確度要求。