[發明專利]甘氨酸的測定方法與甘氨酸測定試劑盒

無效

• 申請號: 201010209413.2
• 申請日: 2010-06-23
• 公開（公告）號: CN102298002A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/31;G01N35/00;C12Q1/32;C12Q1/26;C12Q1/25
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

【技術領域】

本發明涉及食品檢驗測定技術領域，更具體地，本發明涉及甘氨酸測定方法及其試劑盒。?

【背景技術】

甘氨酸為非人體必需氨基酸。甘氨酸有獨特的甜味，能緩和酸、堿味，掩蓋食品中添加糖精的苦味并增強甜味。人體若攝入甘氨酸的量過多，不僅不能被人體吸收利用，而且會打破人體對氨基酸的吸收平衡而影響其它氨基酸的吸收，導致營養失衡而影響健康。甘氨酸不能被人體利用，只能分解轉化為熱能，這樣會增加肝臟負擔。而分解產物中的含氮化合物要通過尿液排出體外，又會增加腎臟負擔。如果大量、長期食用這類食品，可能造成肝腎損傷。部分含乳飲料企業為提高產品中蛋白質含量，在生產加工中違規使用甘氨酸，對青少年及兒童的正常生長發育很容易帶來不利影響。?

按照我國《食品添加劑使用衛生標準》GB2760規定，甘氨酸在作為食品添加劑只允許在調味劑與豆奶中使用，且最高限量為每公斤1克，但在含乳飲料中不允許使用。?

【發明內容】

[要解決的技術問題]?

本發明的目的是提供一種甘氨酸的測定方法。?

本發明的另一個目的是提供一種甘氨酸測定試劑盒。?

[技術方案]?

本發明是通過下述技術方案實現的。?

本發明的方法是一種采用二倍擴增法、酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)與酶(偶)聯法(Couple?Reaction)的聯用技術，利用測定還原型煙酰胺?輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處的吸光度變化測定甘氨酸的方法。?

本發明甘氨酸測定方法的的技術原理是根據下述氰化氫合成酶、Geranoyl?CoA羧化酶、甘油醛-3-磷酸脫氫酶的系列催化反應完成：?

甘氨酸+2輔酶氰化氫合成酶氰化氫+二氧化碳+2還原型輔酶?

二氧化碳+腺苷三磷酸+Geranoyl?CoA?Geranoyl?CoA羧化酶

腺苷二磷酸+磷酸根+3-(4-甲基戊烯-3-醇-1-基)戊烯-2-烯二醇-輔酶A?

磷酸根+甘油醛-3-磷酸+輔酶甘油醛-3-磷酸脫氫酶

?????????????????????????????甘油酸-1，3-雙磷酸+還原型輔酶?

本發明的方法利用氰化氫合成酶(hydrogen?cyanide?synthase；EC?1.4.99.5)酶(偶)聯Geranoyl?CoA羧化酶(geranoyl?CoA?carboxylase；EC?6.4.1.5)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphate?dehydrogenase；EC?1.2.1.59)酶促反應終點法。氰化氫合成酶酶解甘氨酸反應產生二氧化碳，再通過(偶)聯合Geranoyl?CoA羧化酶、甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度，這樣可以通過測量340nm處吸光度上升的程度，可以測算甘氨酸的濃度大小。?

本發明是通過下述技術方案實現的。?

本發明涉及一種甘氨酸的測定方法。該甘氨酸測定方法的步驟如下：?

A、樣品準備：?

A.1標準樣品的制備?

將一定量的甘氨酸溶于水或緩沖液中，再將甘氨酸濃度調整到1毫摩爾/升，得到的溶液作為標準樣品；

A.2待測樣品的制備?

待測液體樣品直接測試，無須預處理；將一定量的待測固體樣品像制備標準樣品一樣溶于水或緩沖液中；?

A.3空白樣品?

所述的水或緩沖液作為空白樣品，其甘氨酸濃度為0毫摩爾/升；?

B、試劑溶液的制備：?

分別移取或稱取緩沖液、穩定劑、輔酶、氰化氫合成酶、Geranoyl?CoA羧化酶、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、腺苷三磷酸、Geranoyl?CoA與甘油醛-3-磷酸，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶液，它們的濃度分別是20-500mmol/L、0.001-7mol/L、0.1-5mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-100mmol/L、1-100mmol/L與1-100mmol/L；?