[發(fā)明專利]一種多羥基甾醇衍生物及其制備和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010209248.0
• 申請日: 2010-06-11
• 公開（公告）號: CN101880302A
• 公開（公告）日: 2010-11-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王斌貴;高書山;李曉明
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00;C12P33/16;A61K31/575;A61P31/10;C12R1/82
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 許宗富;周秀梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)，具體的說是一種多羥基甾醇衍生物及其制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)

真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物。種屬很多，已報道的屬達(dá)1萬以上，種超過10萬個。其營養(yǎng)體除少數(shù)低等類型為單細(xì)胞外，大多是由纖細(xì)管狀菌絲構(gòu)成的菌絲體。在報道的文獻(xiàn)中，很多真菌是病原微生物。如：黑曲霉Aspergillus?niger能引起水分較高糧食的霉變，黃曲霉Aspergillus?flavus能引起幼蠶期的一些重要疾病等等。目前已有文獻(xiàn)報道甾醇衍生物的抗真菌活性(Gallimore?W?A?et?al.，J.Nat.Prod.，2001，64，741-744；Bruno?I?et?al.，J.Nat.Prod.，1993，56，1057-1064；Chludil?H?D?et?al.，J.Nat.Prod.，2005，68，1279-1283)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于提供一種具有抗真菌活性的多羥基甾醇衍生物，及其提取、制備該衍生物的方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種多羥基甾醇衍生物：所述多羥基甾醇衍生物如式A所示：

制備方法，按如下步驟：

1)將真菌產(chǎn)黃青霉EN-24S于PDA以20-35℃培養(yǎng)4-7天作為菌種；

2)將上述菌種接種于固體培養(yǎng)基中，以20-35℃發(fā)酵培養(yǎng)30-35天；所得發(fā)酵產(chǎn)物用過量的乙酸乙酯浸泡2-3次，而后濃縮蒸干得總提取物；

3)將上述所得總提取物用氯仿-甲醇溶解，然后用硅膠柱進(jìn)行色譜分離，先經(jīng)石油醚-乙酸乙酯洗脫后再由氯仿-甲醇洗脫；

4)收集上述由氯仿-甲醇體積比20∶1至10∶1的梯度洗脫下的組分，將洗脫組分再由硅膠柱層析，收集洗脫液體積比10∶1梯度的洗脫組分，純化后即為式A化合物。

所述PDA培養(yǎng)基成分為：陳海水配制的20％的馬鈴薯浸出液1000mL、葡萄糖20g和瓊脂20g，PH?6.5-7.0。所述陳海水配制的20％的馬鈴薯浸出液1000mL為每200g馬鈴薯加入1000mL海水。所述固體培養(yǎng)基的組成為：大米100g，陳海水100mL，蛋白胨0.6g。所述步驟3)中石油醚-乙酸乙酯梯度為1∶0至0∶1；氯仿-甲醇梯度為20∶1至1∶1。所述步驟4)再次硅膠柱層析是的洗脫液為氯仿-甲醇，梯度為20∶1至10∶1；所述步驟4)純化為將洗脫下組分用C-18反相柱純化，洗脫液為體積比為5∶1的甲醇-水，即得純化后式A所示化合物。

多羥基甾醇衍生物的應(yīng)用：所述式A所示多羥基甾醇衍生物具有抑制真菌的作用。所述式A所示多羥基甾醇衍生物具有抑制黑曲霉Aspergillus?niger的作用。所述式A所示多羥基甾醇衍生物可作為制備抗真菌的藥物。

本發(fā)明化合物多羥基甾醇衍生物即16β-乙酰氧基-3β，6β，7β，11β-四羥基-麥角甾-22-烯，英文名為16β-acetoxy-3β，6β，7β，11β-tetrahydroxy-ergost-22-en能夠有效抑制黑曲霉Aspergillus?niger的生長，采用濾紙片法抗菌實驗發(fā)現(xiàn)，其對黑曲霉Aspergillus?niger的抑菌圈直徑為18mm，表明該化合物可用作制備抗真菌的藥物。

本發(fā)明所具有的優(yōu)點：

1.本發(fā)明制備所得多羥基甾醇衍生物可以作為具有抗真菌作用的新藥物成分或先導(dǎo)化合物。

2.本發(fā)明制備所得多羥基甾醇衍生物利用微生物進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，具有操作工藝簡單，生產(chǎn)周期短、產(chǎn)品成本低的特點。

3.本發(fā)明利用微生物發(fā)酵法制備抗真菌化合物對環(huán)境無污染。

具體實施方式

通過下面給出的具體實施例可進(jìn)一步了解本發(fā)明，但它不是對本發(fā)明的限定。

實施例1多羥基甾醇衍生物如式A所示，

式A化合物的制備：

1)將真菌產(chǎn)黃青霉EN-24S培養(yǎng)于PDA(potato?dextrose?agar)培養(yǎng)基中，將培養(yǎng)基配制成平板，然后將保種管斜面上的菌株挑入平板，以28℃培養(yǎng)4-7天，作為下一步培養(yǎng)的菌種，待用；所述PDA培養(yǎng)基組成為：用陳海水配制的200g的馬鈴薯浸出液1000mL，葡萄糖20g，瓊脂20g，PH6.5-7.0。所述陳海水配制的20％的馬鈴薯浸出液1000mL為每200g馬鈴薯加入1000mL海水。陳海水為自然海水經(jīng)沉降、過濾而得。