[發明專利]一種層出鐮孢菌及其菌劑和應用

無效

• 申請號: 201010209217.5
• 申請日: 2010-06-25
• 公開（公告）號: CN101880633A
• 公開（公告）日: 2010-11-10
• 發明（設計）人: 孔令曉;王連生;栗秋生;紀莉景
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01N25/02;A01N25/12;A01P13/02;C12R1/77
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 胡長遠

技術領域

本發明屬于農業微生物領域，具體涉及一種層出鐮孢菌，以及利用該層出鐮孢菌生產的微生物菌劑和應用。

背景技術

列當屬于列當科(Orobanchaceae)、列當屬(Orobanche)，是一年生根寄生雜草，寄生在某些高等植物根上，無葉綠素和根系，以吸盤從寄主植物體內攝取養分和水分。在我國，危害較大的列當主要是向日葵列當、分枝列當和埃及列當。

目前防治列當的方法主要是采用耕作、栽培技術措施或施用化學藥劑；但是由于列當種子產生量大，種子存活期長，且在適宜溫濕度下，種子終年可以萌發，在作物的整個生育期內都會有列當出土，參差不齊，使得現有技術措施的防治效果非常差。

利用雜草的病原微生物研制專化性強、對目標雜草以外的植物影響小、環境負效應少、安全性高的生物除草劑，有可能成為防除雜草的有效途徑。如鐮刀菌屬(Fusarium?spp.)的某些種可以侵染列當，引起發病。王之樾(王之樾等.《新疆農業科技》1981(7)：16-17。王之樾等.《中國生物防治》1985(1)：24-26)從田間自然罹病的列當上分離到一株鐮刀菌(Fusariumorobanches)并制成生防劑F798，用割莖涂液法防治哈密瓜列當，但是該方法需要先將列當的莖部割斷，再涂抹上生防菌液，操作非常麻煩、推廣比較困難，影響防治效果。尖孢鐮刀菌(Fusarium?oxysporum)(HEIKO?THOMAS等.Anna1sof?Botany.1999.83：453-458)能夠在向日葵列當的地下生長階段進行侵染，顯著降低列當種子的萌發和寄生率。鐮刀菌L2菌株(孔令曉等.植物病理學報.200636(5)：466-469)對列當的防治效果達到92.4％，L2菌株粗毒素能夠抑制列當種子萌發，并造成列當種子萌芽管損傷。

經過檢索，沒有發現利用層出鐮孢菌防治列當的報道。

發明內容

針對抗列當品種少，以及化學農藥防治所帶來的防治效果差和污染環境的問題，本發明目的在于提供一種用于列當生物防治的層出鐮孢菌菌株，該菌株可高效、長效抑制在向日葵和煙草上寄生的向日葵列當，并且對環境友好。

本發明另一目的在于提供利用上述層出鐮孢菌菌株生產的微生物菌劑及其制備方法。

本發明第三個目的在于提供上述層出鐮孢菌菌株及其微生物菌劑在防治向日葵列當上的應用。

為實現上述目的，本發明的技術方案如下：

一種層出鐮孢菌(Fusarium?proliferatum)菌株Br-1，已于2010年4月23日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.3759。

利用上述層出鐮孢菌Br-1生產的微生物菌劑，其活性成分為層出鐮孢菌Br-1菌體和/或它的胞外代謝產物。

上述微生物菌劑可以為液態制劑。

上述微生物菌劑可以為顆粒劑。

上述微生物菌劑的制備方法，包括如下步驟：

(1)菌種活化：將低溫保存的菌株Br-1在PDA平板培養基上活化擴繁備用；

(2)種子液的制備：按常規方法制作PDB液體培養基，高壓濕熱滅菌后，接入步驟(1)活化的菌株Br-1，在24～28℃下振蕩培養48～72h，得種子液；

(3)發酵培養：將葡萄糖豆餅粉培養基加入到發酵罐中，用HC1調節葡萄糖豆餅粉培養基的pH值至5，滅菌，然后待溫度降到26℃，采用負壓方法接入步驟(2)的種子液，在溫度為25～26℃、通氣量為1∶0.3～1.0、攪拌速度為140～180rpm條件下發酵培養44～60h；所述的葡萄糖豆餅粉培養基的組成成分及其重量百分比為：葡萄糖1～2％，豆餅粉0.2～0.4％，NH₄NO₃0.1～0.2％，KH₂PO₄0.2～0.4％和MgSO₄·7H₂O?0.1～0.2％，其余為水；

(4)檢測發酵液中分生孢子數量，待發酵液中分生孢子數量達到10⁸個/ml，停止發酵培養；所得即為Br-1菌株的液體制劑。

Br-1菌株顆粒劑的制備

將上述Br-1菌株的液體制劑經鈉膜過濾濃縮10倍，然后按照濃縮液與草炭之間1∶7的比例向濃縮液中加入草炭，混合擠壓成型，得Br-1菌株的顆粒劑，活菌含量達到10⁸個/克。

上述制備方法步驟(2)中所述的溫度優選為25～26℃。