[發明專利]一種檢測不同基質中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的方法

無效

• 申請號: 201010209201.4
• 申請日: 2010-06-25
• 公開（公告）號: CN102297904A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發明（設計）人: 楊美華;張曉飛
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院藥用植物研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發明涉及一種測定不同基質中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的方法，特別是涉及采用氣相色譜-電子捕獲檢測法測定，氣相色譜-質譜聯用確證中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的方法。

背景技術：

單端孢霉烯族毒素是一類由鐮刀菌屬中多種真菌所產生的次生代謝產物，在自然界中分布極為廣泛，是自然發生的最危險的食品污染物，對人畜健康危害十分嚴重。由于鐮刀菌為土壤習居菌，很多中藥易受到鐮刀菌的侵染，是很多根和根莖類藥材根腐病的主要致病菌，而且上述鐮刀菌中部分為產毒菌，可產生單端孢霉烯族類毒素，因此，很有必要對中藥中單端孢霉烯族毒素進行研究，建立毒素的檢測方法，制訂其合理的限量標準，以保證中藥的安全有效。

單端孢霉烯族化合物分為二大類，A型和B型，其中A型毒性最大，研究得也最多，T-2和HT-2毒素就屬于A型。T-2毒素是鐮刀菌所產生的單端孢霉烯族毒素中毒性最強的一種，HT-2毒素是T-2毒素的代謝產物。T-2毒素在多種谷物(小麥、玉米、大麥、燕麥、黑麥)及其制品(麥芽、啤酒、面包)中廣泛存在，其毒性強烈，至今已有3種地方病(食物中毒性白細胞缺乏癥、大骨節病、克山病)的病因被認為與T-2毒素有關，對人畜構成很大危害。1973年聯合國糧農組織和世界衛生組織在日內瓦召開的聯席會議上，把這類毒素同黃曲霉素一樣作為自然存在的最危險的食品污染源，尤其是美國指責前蘇聯、越南在東南亞使用“黃雨(yellow?rain)”毒素(其中含有T-2毒素)以后，有關T-2，HT-2毒素對人類健康的危害引起了各國政府和科學家的較大關注。

發明內容

到目前為止，國內外報道的方法大多僅限于對食品、農產品以及飼料中T-2，HT-2毒素的分析，對中藥中T-2，HT-2毒素的分析，目前還是空白。因此對中藥中T-2，HT-2毒素測定方法的建立研究迫在眉睫。現有的測定食品、農產品以及飼料中的T-2，HT-2毒素的方法，由于樣品基質相對簡單，干擾較小，一般都較容易測定。本發明克服現有技術不足，選擇了適用于中藥中T-2，HT-2毒素的提取、凈化方法，優化了氣相，氣質的色譜條件，保證樣品處理快捷簡便，含量測定結果準確性高，重現性好，故采用該方法能更加準確的對不同基質中藥中的T-2，HT-2毒素進行測定。

本發明是通過采用氣相色譜-電子捕獲檢測法測定中藥中的T-2，HT-2毒素的方法，同事建立了不同基質中T-2，HT-2毒素的氣相色譜-質譜聯用確證法。

具體的不同基質中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素測定的方法，可以通過以下步驟實現：

儀器、藥品及材料：

儀器：

Agilent?GC-6890N氣相色譜儀、Ni電子捕獲檢測器，美國安捷倫公司；

Agilent?7683B系列自動進樣器，美國安捷倫公司；

Varian?431氣相色譜儀，美國瓦里安公司；

Varian?300三重四級桿質譜儀，美國瓦里安公司；

TGL-16C型高速離心機，上海安亭科學儀器廠；

Waring高速均質器，美國Waring公司；

WH-861型旋渦混合器，金壇市盛藍儀器制造有限公司；

PGG-01D型干式氮吹儀，天津艾維歐科技發展有限公司

DHG-9030A型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司

T-2&HT-2test-HPLC免疫親和柱，美國VICAM公司；

GF/A型玻璃微纖維濾紙，英國WHATMAN公司。

對照品：

T-2，HT-2毒素標準品購自美國Sigma公司，純度≥99％；N-七氟丁酰咪唑(HFBI)，美國Afla?Aesar公司；正己烷為色譜純，天津市光復精細化工研究所；水為重蒸水；其余試劑均為分析純。

樣品：

所測樣品分別購自江西樟樹、陜西寶雞、江蘇鎮江、北京以及貴州遵義，所有樣品均為市場上隨機購買而來，經中國醫學科學院藥用植物研究所張本剛教授鑒定，低溫干燥后備用。

1、氣相色譜-電子捕獲檢測法測定中藥中的兩種A型單端孢霉烯族毒素

a.色譜條件：用毛細管色譜柱分離，電子捕獲檢測器檢測，以氮氣或氦氣為載氣，進樣口溫度260-280℃，檢測器溫度290-310℃，程序升溫，不分流進樣。

b.溶液配制：

對照品溶液的配制：分別稱取對照品適量，加乙腈或甲醇制成溶液；

衍生化試劑的配制：取七氟丁酰咪唑適量，加甲苯-乙腈溶液制成溶液。