[發(fā)明專利]一種檢測(cè)空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010206381.0
• 申請(qǐng)日: 2010-06-23
• 公開（公告）號(hào): CN101851662A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉光英;高紅;張冉;周圍;金志雄;萬(wàn)永繼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/06
• 分類號(hào): C12Q1/06;C12Q1/04
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責(zé)任公司 50209
• 代理人: 周韶紅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種能夠定性或定量檢測(cè)空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

白僵菌是重要的昆蟲病原真菌，目前世界上發(fā)現(xiàn)死于真菌病的昆蟲中，白僵病占20％以上。資料顯示白僵菌可寄生15個(gè)目700多種昆蟲及螨類，寄主范圍非常廣泛，所以在環(huán)境中白僵菌的分生孢子自然繁殖量大；另外，白僵菌也是一種重要的微生物農(nóng)藥，通過人工繁殖釋放后也會(huì)造成環(huán)境中白僵菌分生孢子的局部驟增和擴(kuò)散。白僵菌的分生孢子形成于昆蟲體表，容易脫落，且數(shù)量多，重量輕，容易隨風(fēng)傳播，由于空氣中大量散布的白僵菌分生孢子可污染桑園或直接擴(kuò)散到蠶室內(nèi)感染家蠶，導(dǎo)致近年來蠶桑主產(chǎn)區(qū)頻繁出現(xiàn)蠶白僵病大范圍的爆發(fā)，給養(yǎng)蠶農(nóng)戶帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重制約著蠶桑產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，因此監(jiān)測(cè)蠶區(qū)空氣中白僵菌分生孢子污染和擴(kuò)散情況，及時(shí)采取相應(yīng)對(duì)策，對(duì)于預(yù)防蠶白僵病的發(fā)生具有重要意義。

在實(shí)驗(yàn)室條件下白僵菌通過接種的方法可以在許多培養(yǎng)基上培養(yǎng)，但室外環(huán)境復(fù)雜，微生物種類多，需要一種能采集和培養(yǎng)白僵菌的選擇性培養(yǎng)基，以檢測(cè)空氣中白僵菌分生孢子的污染和擴(kuò)散情況。目前用于監(jiān)測(cè)空氣中白僵菌分生孢子的方法尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種可采集和檢測(cè)空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基能夠定性或定量檢測(cè)空氣中白僵菌分生孢子，能有效抑制雜菌生長(zhǎng)，易于觀察菌落特征，具有成本低，制作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。能應(yīng)用于養(yǎng)蠶區(qū)域?qū)Π捉┚稚咦游廴竞蛿U(kuò)散的檢測(cè)。

本發(fā)明提供的一種檢測(cè)空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基，制備配方如下：黃豆芽100-250g，蔗糖10-25g，鏈霉素0.1-0.5g，孟加拉紅0.1-0.5g，瓊脂15-20g，加水至1000mL，調(diào)節(jié)pH值為8.0-11.0。

本發(fā)明提供的一種檢測(cè)空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基，通過以下方法制備：

1)取新鮮的黃豆芽，洗凈后晾干表面水分，稱取配方所述質(zhì)量，加水至990mL，煮沸40分鐘，雙層紗布過濾；

2)濾液中加入配方所述質(zhì)量的蔗糖、孟加拉紅、瓊脂，煮沸后補(bǔ)足水量至990mL；

3)放入高壓滅菌鍋中，壓強(qiáng)1.035×10⁵Pa，溫度121℃±1℃，保持20-30分鐘后，自然冷卻；

4)滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至55℃±5℃時(shí)，990mL培養(yǎng)基加入剛配制的相應(yīng)質(zhì)量百分比濃度的鏈霉素溶液10mL，調(diào)節(jié)pH值為8.0-11.0。

本發(fā)明提供的一種檢測(cè)空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基的使用方法為，使用時(shí)將培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)皿中，暴露在空氣中10-60分鐘后，25℃-30℃培養(yǎng)3天即可根據(jù)菌落情況檢測(cè)出空氣中白僵菌分生孢子污染和擴(kuò)散情況。

本發(fā)明提供的一種檢測(cè)空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基主要優(yōu)點(diǎn)如下：

1、本發(fā)明的培養(yǎng)基具有適合白僵菌生長(zhǎng)的必需營(yíng)養(yǎng)成份，在培養(yǎng)基中添加抗生素和孟加拉紅不僅能夠抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng)，而且能夠抑制真菌菌落擴(kuò)散，從而避免了某些氣生性強(qiáng)的霉菌菌落的蔓延。同時(shí)提供的堿性條件可有效抑制非目的菌的生長(zhǎng)。

2、本發(fā)明的培養(yǎng)基加入孟加拉紅后，整個(gè)培養(yǎng)基顏色呈淡粉紅色，白僵菌菌落背面呈鮮紅色，易于鑒別。

3、本發(fā)明的培養(yǎng)基配方無特殊原料，容易取得，制備簡(jiǎn)單，使用方便，無需專門的技術(shù)培訓(xùn)，易于推廣應(yīng)用。

具體實(shí)施方式

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

配方：黃豆芽100g，蔗糖25g，鏈霉素0.5g，孟加拉紅0.5g，瓊脂20g，加水至1000mL。

制備方法：

1)取新鮮的黃豆芽，洗凈后晾干表面水分，稱取100g，加水至990mL，煮沸40分鐘，雙層紗布過濾；

2)濾液中加蔗糖25g，孟加拉紅0.5g，瓊脂20g，煮沸后補(bǔ)足水量至990mL；

3)放入高壓滅菌鍋中，壓強(qiáng)1.035×10⁵Pa，溫度121℃±1℃，保持20-30分鐘，自然冷卻；

4)滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至55℃±5℃時(shí)，990mL培養(yǎng)基加入剛配制的質(zhì)量百分比濃度為5％的鏈霉素溶液10mL，調(diào)節(jié)最終pH值為8.0。

實(shí)施例2：

配方：黃豆芽150g，蔗糖15g，鏈霉素0.3g，孟加拉紅0.3g，瓊脂18g，加水至1000mL。

制備方法：

1)取新鮮的黃豆芽，洗凈后晾干表面水分，稱取150g，加水至990mL，煮沸40分鐘，雙層紗布過濾；