[發明專利]朝鮮淫羊藿葉中淫羊藿次苷Ⅰ單體的分離方法

有效

• 申請號: 201010206046.0
• 申請日: 2010-06-23
• 公開（公告）號: CN101891782A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發明（設計）人: 劉忠英;劉志強;丁一迪
• 申請（專利權）人: 吉林大學;中國科學院長春應用化學研究所
• 主分類號: C07H17/07
• 分類號: C07H17/07;C07H1/08
• 代理公司: 長春科宇專利代理有限責任公司 22001
• 代理人: 馬守忠

技術領域

本發明屬于天然藥物化學領域，涉及用高速逆流色譜法從朝鮮淫羊藿葉的粗提物中分離淫羊藿次苷I的單體的分離方法。

背景技術

淫羊藿是近幾年天然藥物研究的熱點之一。其主要成分淫羊藿苷的體內過程有較充分的研究(YE?L?K，CHEN?J?M，L?IU?S?H，et?al1Pharmacokinetics?of?icariinin?rats[J]1Chin?Pharm?J(中國藥學雜志)，1999，34(1)：33-36，而淫羊藿次苷I的體內過程研究卻未見報道。從現有的研究成果看來，淫羊藿次苷I在酶水平上有很好的活性，極有希望成為治療勃起功能障礙的有效藥物。

淫羊藿次苷I是淫羊藿苷的體內代謝產物之一，Lenoble等(LENOBLE?R，R?ICHHEIMER?S，BA?ILEY?D?T，et?al1?Compositions?comprising?icariside?I?and?anhydroicaritin?and?methods?formaking?the?same：PCT，WO?02/13842?A1[P]120022022211)報道了淫羊藿次苷I對PDE-25酶具有很好的抑制作用，IC50為0.133mg/L，顯示了其在治療勃起功能障礙方面的作用。

目前，國外有采用柱色譜法分離提取淫羊藿次苷I的報道(Lenoble，et?al.″Compositions?comprising?icariside?I?and?anhydroicaritin?and?methods?for?making?the?same″Unit?States?Patent?2002(6399579))。柱色譜分離純化黃酮類化合物存在由不可逆吸附導致產率低的缺點，而且分離過程十分耗時、耗力，不利于黃酮類化合物的大量分離提取。

目前無人用高速逆流色譜(HSCCC)技術分離淫羊藿次苷I。

發明內容

為了消除因為柱色譜分離純化黃酮類化合物存在由不可逆吸附導致產率低，而且分離過程十分耗時、耗力，不利于黃酮類化合物的大量分離提取的缺點。本發明提供了朝鮮淫羊藿葉中淫羊藿次苷I單體的分離方法。

高速逆流色譜(HSCCC)與高效液相色譜(HPLC)最大的不同在于其柱分離系統。高速逆流色譜包括儲液罐、泵、螺旋管分離柱、檢測器、色譜工作站或數據采集軟件或記錄儀以及餾分收集器等組成部分，其分離原理為液液萃取。

首先選擇預先平衡好的兩相溶劑中的一相為固定相，并將其充滿螺旋管柱，然后使螺旋管柱在一定的轉速下高速旋轉，同時以一定的流速將流動相泵入柱內。在體系達到流體動力學平衡后(即開始有流動相流出時)，將待分離的樣品注入體系，其中組分將依據其在兩相中分配系數的不同實現分離。分離效果與所選擇的溶劑系統、固定相和流動相的選擇、洗脫方式、流動相的流速、儀器的旋轉的方向和轉速、樣品濃度和進樣方式以及柱溫等都有密切關系。因而，在采用逆流色譜分離時，在操作方法和工作程序等方面都有許多獨特之處。常用的檢測器有紫外-可見光檢測器(UV-VIS)，此外還有蒸發光散射檢測器(ELSD)以及質譜檢測器等。

高速逆流色譜(HSCCC)分離方法在植物藥物活性成分分離中的優勢主要體現在同一臺儀器可用于不同極性的物質的分離，且制備量大，分離效率高，操作靈活。可以實現多種形式的梯度洗脫過程，如pH梯度、極性梯度等，還可以進行正向洗脫或反向洗脫，甚至可以使兩相溶劑同時雙向流動，實現真正連續的逆流色譜過程。

本發明提供了朝鮮淫羊藿葉中淫羊藿次苷I單體的分離方法，其方法和步驟如下：

a按體積比為3∶7∶3∶7～6∶4∶6∶4分別稱量正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水于分液器中，充分震蕩，靜置，放置過夜；

b以澄清的上相為固定相，下相為流動相，以0.5～10mL/min的流速使固定相充滿螺旋管柱，然后螺旋管柱以1300～1600rpm/min的速度旋轉，穩定1～30min后，以0.5～5.0mL/min的速度泵入流動相，使體系達到流體動力學平衡；

c根據高速逆流色譜的進樣系統選擇進樣體積，以1.0～10mg/mL的溶液濃度進樣，下相溶解淫羊藿次苷I的粗提物，檢測器波長為272nm，溫度為10～40℃；所述的下相體積不得少于3mL；

d第一個出現的大峰不是淫羊藿次苷I，第二個出現的峰為淫羊藿葉中提取的淫羊藿次苷I，溶液顏色呈熒黃色，經過冷凍干燥，得淫羊藿次苷I單體粉末；

步驟c中所述的淫羊藿次苷I粗提物是根據以下方法所得：