[發明專利]快速檢測甲基毒死蜱的免疫膠體金試紙條及其制備方法

無效

• 申請號: 201010204947.6
• 申請日: 2010-06-22
• 公開（公告）號: CN101865923A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 劉鳳權;華修德;錢國良;秦娜;李剛
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一、技術領域：

本發明涉及農藥殘留免疫分析技術領域的一種快速檢測器具，特別是涉及以納米膠體金顆粒標記抗體的甲基毒死蜱膠體金快速檢測試紙條。

二、背景技術：

甲基毒死蜱(Chlorpyrifos-methyl)是一種廣譜的有機磷殺蟲劑，用于防治貯藏谷物中的害蟲和各種葉類作物上的害蟲，也用來防治蚊成蟲、蠅類、水生幼蟲和衛生害蟲，目前仍在廣泛應用。其作用機理是抑制乙酰膽堿酯酶的活性。乙酰膽堿是神經遞質，過量的乙酰膽堿過度刺激乙酰膽堿受體，導致靶生物死亡。然而，一些不是預定目標的生物也遭到了毒害，包括人、魚等其他生物。

目前，對農藥殘留的檢測方法主要是儀器分析方法和酶聯免疫分析方法(ELISA)等。儀器分析方法包括高效液相色譜法(High?performance?liquid?chromatography，HPLC)、氣相色譜法(Gas?chromatography，GC)、薄層色譜法(Thin?layer?chromatography，TLC)、液-質串聯法(HPLC-MS)和氣-質串聯法(GC-MS)等，這些儀器分析方法雖然可以達到較高的檢測靈敏度，但需要復雜昂貴的儀器設備及專業操作人員，加之樣品前處理繁瑣費時、檢測費用高，難以滿足快速、在線檢測的需要。ELISA方法，法所需要的檢測時間較長，操作過程仍較復雜，檢測成本較高，而且只能在室內進行檢測等缺陷。因而ELISA方法的應用受到很大的限制。

本發明的甲基毒死蜱膠體金試紙條，無需專業操作人員及任何輔助類儀器，根據反應所顯現的條帶幾分鐘內即可判定結果，不僅操作簡便、快速、結果直觀準確、成本低，并且可以在室外進行檢測。

三、發明內容：

本發明的目的是：克服上述甲基毒死蜱檢測技術的不足，研制出一種特異、敏感、快速、簡便的甲基毒死蜱殘留快速檢測試紙條。

本發明的技術方案是：一種甲基毒死蜱快速檢測試紙條，含有襯板和在襯板上一次銜接的樣品墊、金標結合墊、纖維素膜、和吸水墊，金標結合墊為吸附甲基毒死蜱金標抗體的玻璃纖維棉，在纖維素膜上有用甲基毒死蜱半抗原偶聯的載體蛋白溶液印制的直線式隱形檢測線，用兔抗鼠IgG印制的直線式隱形對照線，兩條線平行組合排列為“||”。

所述的襯板為不吸水的韌性材料。

所述的韌性材料用硬質塑膠條或不吸水硬紙條制成。

所述的樣品墊為玻璃纖維棉，或尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜和聚酯膜。

所述的樣品墊用玻璃纖維棉制成。

所述的吸水墊為吸水能力較強的吸水濾紙或濾油紙。

所述的纖維素膜為硝酸纖維素膜，或為純纖維素膜，或為羧化纖維素膜。

所述的保護膜為不透明的膠膜，樣品墊、金標結合墊對應的保護膜上印制有待測樣品標記線，該標記線偏向樣品墊一側約0.5厘米處。

所述的甲基毒死蜱金標抗體為膠體金標記的甲基毒死蜱單克隆抗體，所述的偶聯甲基毒死蜱半抗原的載體蛋白為牛血清白蛋白BSA，或為雞卵清白蛋白OVA，或為人血清白蛋白HAS。

本發明的快速檢測試紙條具有以下優點：

1.特異性強，敏感性高。本膠體金試紙條以膠體金標記高親和力的單克隆抗體為基礎制備而成，金標抗體中的膠體金顆粒與抗體分子之間無共價鍵，兩者通過異性電荷間的范德華力相結合，膠體金的標記對單克隆抗體的特異性和親和力影響很小，而且有較高的標記率。因此，試紙條很好的保留了單克隆抗體的特性，具有較強的特異性和較高的敏感性，檢出最低限量可達到600ppb。

2.簡便、快速。在使用本膠體金試紙條時，無需任何其他輔助儀器，可現場操作，只要將檢測樣加入樣品墊，在10分鐘內即可判定檢測結果。

3.結果顯示形象、直觀、準確。膠體金試紙條的檢測結果以纖維素膜上的顯色情況來判斷。如果樣品中有待測物時，待測物和金標抗體結合形成抗原一金標抗體復合物，并且繼續上移，遇T線不顯色或者顯色很弱即表示檢測樣品陽性或者弱陽性；如果樣品中沒有待測樣品時，金標抗體繼續上移，遇T線顯示一條清晰紅線即表示檢測樣品陰性。C線顏色的有或無表示此試紙條的有效或無效。結果判定形象、直觀、準確、簡單明了。

4.節省費用，適用范圍廣，便于推廣。使用膠體金試紙條進行檢測，比使用儀器和ELISA試劑盒檢測進行檢測的費用大幅降低。再者，試紙條的使用范圍廣，可滿足不同層次人員的需要，便于推廣應用，具有廣闊的市場前景和明顯的經濟和社會效益。

四、附圖說明：

圖1、甲基毒死蜱快速檢測試紙條俯瞰結構示意圖。

圖2、甲基毒死蜱快速檢測試紙條剖面結構示意圖。