[發明專利]一種SDS-PAGE快速脫色方法及其專用脫色杯

有效

• 申請號: 201010204524.4
• 申請日: 2010-06-22
• 公開（公告）號: CN101871858A
• 公開（公告）日: 2010-10-27
• 發明（設計）人: 金立鋒;尹啟生;宋紀真;楊軍;奚家勤;李鋒;羅朝鵬;王信民;王廣山
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30;G01N27/447
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 姜振東

技術領域

本發明屬于電泳凝膠脫色技術，具體涉及一種SDS-PAGE快速凝膠脫色方法及其專用脫色杯，本發明采用蒸餾水或去離子水作為脫色劑，結合專門的脫色儀，在特定溫度下利用加熱脫色劑方式進行凝膠脫色。

背景技術

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，是在聚丙烯酰胺凝膠系統中引進SDS(十二烷基磺酸鈉)，SDS與蛋白質疏水部分相結合，斷裂分子內和分子間氫鍵，破壞蛋白質的二級和三級結構的折疊結構，并使其穩定地存在于一個廣泛均一的溶液中。蛋白質在一定濃度的含有強還原劑的SDS溶液中，與SDS分子按比例結合，形成帶負電荷的SDS-蛋白質復合物，這種復合物由于結合大量的SDS，使蛋白質喪失了原有的電荷狀態形成儀保持原有分子大小為特征的負離子團塊，從而降低或消除了各種蛋白質分子之間天然的電荷差異，由于SDS與蛋白質的結合是按重量成比例的，因此在進行電泳時，蛋白質分子的遷移速度取決于分子大小。當分子量在15KD到200KD之間時，蛋白質的遷移率和分子量的對數呈線性關系，符合下式：logMW＝K-bX，式中：MW為分子量，X為遷移率，k、b均為常數，若將已知分子量的標準蛋白質的遷移率對分子量對數作圖，可獲得一條標準曲線，未知蛋白質在相同條件下進行電泳，根據它的電泳遷移率即可在標準曲線上求得分子量(Harnes，B.D?and?Rickwood，D，1981，GelElectrophoresis?of?Proteins：A?Practical?Approach.Oxford?and?Washington.D.C.：IDL.Press.；Creighton，R.F.et?al.，1989，Protein?Structure：Apractical?approach.Oxford：IRL?Press.)。

SDS-PAGE已成為現代生物學研究中重要技術手段，是對蛋白質進行分離、量化、比較及特性鑒定的一種經濟、快速、可重復的方法。SDS-PAGE易于操作和用途廣泛，它已成為許多研究領域中一種重要的分析技術(郭堯君，1999，蛋白質電泳實驗技術，P123～156，科學出版社；汪家政，范明，2000，蛋白質技術書冊，P77～108，科學出版社)。SDS-PAGE包括四個主要步驟，即：凝膠制備、電泳、染色、脫色。其中凝膠制備和電泳已有成熟的技術和專用設備，目前SDS-PAGE的凝膠染色主要方法有考馬斯亮藍染色、銀染、CaCl、KCl等方法(郭堯君，1999，蛋白質電泳實驗技術，P123～156，科學出版社；汪家政，范明，2000，蛋白質技術書冊，P77～108，科學出版社)，其中考馬斯亮藍染色由于其清晰度最好，靈敏度較高而被廣泛采用。然而考馬斯亮藍染色后需進行脫色，將PAGE膠上非特異結合的考馬斯亮籃脫掉后，才能顯示出清晰的電泳條帶。凝膠脫色需要用醋酸-甲醇或醋酸-乙醇脫色液在脫色搖床上脫色2～3小時，中間需要更換幾次脫色液，脫色一次至少需要60ml脫色液，不僅浪費材料，而且用過的脫色液會造成環境污染，同時脫色液中甲醇和醋酸對人健康危害嚴重，還不能及時看到試驗結果。很多研究者對傳統的方法進行了不同程度的改進，肖亞中等(肖亞中，王軍，蒲春雷，2002，一種簡易的聚丙烯酰氨凝膠脫色方法，生物學雜志19(4)，P34～35)發現使用20％乙醇和10％冰醋酸作為脫色劑，脫色液中放置紙巾吸附色素，此方法可以縮短脫色時間，減少脫色液用量；最近張曉楠等(張曉楠，王爽，候穎，2008，聚丙烯酰氨凝膠的快速脫色及干膠的簡易制作，醫學分子生物學雜志5(1)；P40～41)在此基礎上建立了一種更為簡便的方法，用自來水作為脫色液，加入濾紙后，用微波爐加熱到70℃后，然后在脫色搖床震搖脫色。然而我們在試驗中發現，自來水中加熱很容易將凝膠變成白色，不能恢復，更不能進行結果驗證，此方法可行性不高。

發明內容

本發明的目的在于改進SDS-PAGE膠傳統脫色技術，徹底擺脫使用傳統脫色液脫色帶來的種種不便，而提供一種更加高效、快捷、安全的SDS-PAGE快速脫色方法，該技術結合專門配備的儀器可以在1.5～2小時內完成染色脫色過程，并且電泳條帶清晰可辨、背景干凈。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：本發明的SDS-PAGE快速脫色方法，包括以下步驟：

1)凝膠清洗：電泳凝膠染色結束后，用蒸餾水、去離子水或超純水將膠清洗2-3遍；