[發明專利]芘人工完全抗原的制備方法

無效

• 申請號: 201010202756.6
• 申請日: 2010-06-10
• 公開（公告）號: CN102276712A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 魏國華;孫艷靈;杜宇國
• 申請（專利權）人: 中國科學院生態環境研究中心
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;G01N27/62
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技術領域

本發明涉及一種芘(Pyrene)人工完全抗原的制備方法，屬于有機化學及免疫學技術范疇。?

背景技術

多環芳烴(Polycyclic?Aromatic?Hydrocarbons；PAHs)是一類具有潛在致突變、致癌/助癌特性且在環境中較為穩定的微污染物。多環芳烴主要來源于城市生活排污、工業廢水排放、石油污染和有機質自燃等，具有高毒、持久、長距離遷移和高生物蓄積性等特點，對環境安全和人類健康具有嚴重的危害。PAHs在空氣、水、土壤等環境中廣泛分布，同時PAHs在各種溶劑中具有很高的溶解度，由于食品產地環境受到污染以及在飲料和酒品加工制作過程中均可產生PAHs，致使PAHs在食品、飲料及酒品等非水體系中存在，有人在烤制的面包片、牛奶、酒、茶飲料中發現了微量的PAHs，長期食用含有PAHs的食物會對人體健康將產生潛在威脅。目前對多環芳烴的檢測分析方法有很多，如高效液相色譜法，氣相色譜一質譜聯用法等。但樣品預處理煩瑣，操作復雜，儀器昂貴，很難達到快速、簡便的現場檢測要求。如果能夠采用金標免疫或酶聯免疫的方法，則可達到快速、靈敏并能現場檢測PAHs的需要。為了建立其免疫分析的方法，首先必須得到PAHs的抗體。PAHs分子結構簡單，分子量小，屬于半抗原，不能直接免疫制取抗體，必須首先將其與載體蛋白偶聯制備出它的完全抗原，才能誘發動物產生抗體。?

發明內容

本發明的目的在于尋求適當的試劑，用簡單、實用的方法合成出芘(Pyrene)的完全抗原，為以后篩選出它的特異性抗體和建立免疫分析方法提供基礎。?

發明內容?

本發明涉及一種芘(Pyrene)人工完全抗原的制備方法，屬于有機化學及免疫學技術范疇。利用1-芘丁酸的羧酸基團，將1-芘丁酸直接或者通過適當長度的連接臂鏈接到載體蛋白上，制備芘的完全抗原。載體蛋白可以是牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白(OVA)，血蘭蛋白(KLH)或人血清蛋白(HSA)。MALDI-TOF-MS質譜確定載體蛋白上芘的數量。本方法操作簡單，無需特別的儀器設備，成本低廉，為以后篩選出它的特異性抗體和建立免疫分析方法提供了基礎。?

具體實施方式

實施例1：?

將1-芘丁酸(10mg)，NHS(14mg)，EDC(40mg)溶解在DMF(3ml)中，氮氣保護下，室溫反應10小時；然后將上述反應混合物離心，取上清液慢慢滴加到BSA(40mg)的PBS緩沖溶液中(20ml)。室溫下反應5小時，然后離心，將上清液裝入分子量1萬的透析膜制備的透析袋中，透析袋懸于2000ml燒杯的PBS緩沖液中，4℃下透析7天，然后將透析袋中的液體冷凍干燥即為合成的芘的完全抗原。MALDI-TOF-MS質譜確定抗原的分子量為：70256.?

實施例2：?

將1-芘丁酸(100mg)，化合物A(40mg)，化合物B(0.05ml)溶解在NMM(3ml)中，氮氣保護下，-20℃下反應5小時，常規有機反應處理，柱色譜分離后得到化合物C純品。將化合物C(200mg)，化合物D(230mg)溶解在DCM中，0℃下加入DMAP(250mg)，反應5小時，常規有機反應處理，柱色譜分離后得到化合物E純品。化合物E(40mg)溶解在DMF(2ml)中，然后慢慢滴加到BSA(140mg)的PBS緩沖溶液中(20ml)。室溫下反應5小時，然后離心，將上清液裝入分子量1萬的透析膜制備的透析袋中，透析袋懸于2000ml燒杯的PBS緩沖液中，4℃下透析7天，然后將透析袋中的液體冷凍干燥即為合成的芘的完全抗原。MALDI-TOF-MS質譜確定抗原的分子量為：69784.?