[發(fā)明專(zhuān)利]一種耐低溫硝化細(xì)菌的篩選方法

無(wú)效

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• 申請(qǐng)日: 2010-06-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102286390A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙軍;張巍;郎咸明;代秀蘭;李曉東;晁雷;匡德舜;張丹
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 遼寧北方環(huán)境保護(hù)有限公司;遼寧省環(huán)境科學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 許宗富;周秀梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及環(huán)境微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的說(shuō)是一種耐低溫硝化細(xì)菌的篩選方法。

背景技術(shù)

硝化細(xì)菌是一類(lèi)具有硝化作用的化能自養(yǎng)細(xì)菌，包括亞硝酸菌和硝酸菌兩個(gè)生理菌群。其主要特性是：亞硝酸細(xì)菌和硝酸細(xì)菌都是絕對(duì)好氣的自養(yǎng)菌，由于其好氧性，依附性和產(chǎn)酸性，喜歡生長(zhǎng)在堿性的土壤中，它們不能在一般含有機(jī)質(zhì)的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，生長(zhǎng)速率低。由于硝化細(xì)菌的上述特點(diǎn)，在一般的污水處理系統(tǒng)中硝化細(xì)菌的含量較低。而硝化細(xì)菌是生物硝化中起主要作用的微生物，污水中硝化細(xì)菌的含量與硝化速度成正比關(guān)系。

俄國(guó)微生物學(xué)家維諾格拉德斯基首先利用以硅膠作為凝固劑的無(wú)機(jī)固體培養(yǎng)基，分離出這兩種菌，并對(duì)硝化作用進(jìn)行了較詳細(xì)的研究。這兩類(lèi)細(xì)菌在人工培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)量都很少，在硅膠培養(yǎng)基上所形成菌落的直徑只不過(guò)200μm，須用顯微鏡來(lái)觀察。此外，這兩種菌也難以純化，常和其他細(xì)菌伴生在一起。

對(duì)于硝化細(xì)菌培養(yǎng)方面的研究，國(guó)外已有此類(lèi)技術(shù)專(zhuān)利，其中一些已經(jīng)形成工業(yè)化生產(chǎn)，但產(chǎn)品價(jià)格較昂貴，并且必須經(jīng)常性向反應(yīng)器中投加，以補(bǔ)充流失的硝化細(xì)菌量，并抑制其它菌種的生長(zhǎng)。法國(guó)的Tappe?W.和Tomaschewiski?C.采用留有微生物的簡(jiǎn)易發(fā)酵罐來(lái)培養(yǎng)硝化細(xì)菌，認(rèn)為在合適的條件下硝化細(xì)菌經(jīng)過(guò)5個(gè)星期的連續(xù)純培養(yǎng)，其含量可達(dá)2.7×10⁹個(gè)mL^-1。Hung?Yuanfang等人提出的通過(guò)投加葡萄糖和酵母膏等營(yíng)養(yǎng)物，促進(jìn)硝化菌和亞硝化菌的生長(zhǎng)，可使焦化廢水中90％的氨氮在7～14d內(nèi)轉(zhuǎn)化為亞硝態(tài)或硝態(tài)氮，當(dāng)硝化細(xì)菌增加到一定數(shù)量后，不需再投加營(yíng)養(yǎng)物即可維持一定的硝化速率。

硝化細(xì)菌絕大多數(shù)都是專(zhuān)性化能無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)菌，一般的種類(lèi)不能在有機(jī)培養(yǎng)基上生存，也不需要外源生長(zhǎng)因素，對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求，專(zhuān)一性很強(qiáng)。在實(shí)驗(yàn)室對(duì)硝化細(xì)菌的分離通常較為困難，以致有關(guān)它們的細(xì)菌學(xué)和生物化學(xué)的研究工作進(jìn)展很慢。主要原因是，硝化細(xì)菌的代時(shí)長(zhǎng)，平均在10h以上，伴生的異養(yǎng)細(xì)菌生長(zhǎng)迅速，超過(guò)硝化細(xì)菌。而一般細(xì)菌代時(shí)約幾十分鐘，繁殖速度快。另外，硝化細(xì)菌具有生長(zhǎng)在固體表面的習(xí)性，即使在液體培養(yǎng)基上，他們也往往附著在不溶性固體顆粒或器壁表面上，粘連在一起，給分離工作帶來(lái)不便。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的硝化細(xì)菌的最適宜生長(zhǎng)溫度多為30～35℃，這樣高的溫度在污水處理的實(shí)際運(yùn)行過(guò)程中無(wú)法達(dá)到，對(duì)北方寒冷地區(qū)來(lái)說(shuō)，偏低的水溫明顯不利于普通的硝化細(xì)菌發(fā)揮其對(duì)氨氮的去除作用。因此，探求一種新型的篩選低溫硝化細(xì)菌的方法是十分必要的。

研究和利用低溫硝化細(xì)菌的硝化作用，開(kāi)發(fā)經(jīng)濟(jì)的硝化細(xì)菌富集技術(shù)，提高硝化細(xì)菌的產(chǎn)率，加速生活污染物的處理，減輕環(huán)境污染負(fù)荷，對(duì)于在特殊環(huán)境下工作的人群，提供良好的生存環(huán)境，對(duì)我國(guó)的污水處理和環(huán)境保護(hù)事業(yè)具有著重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種篩選低溫硝化細(xì)菌的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種耐低溫硝化細(xì)菌的篩選方法：

1)富集培養(yǎng)：取樣品接種于硝化細(xì)菌培養(yǎng)基中在，接種量為0.5-1ml，在15-20℃、150-160r/min下恒溫振蕩培養(yǎng)10-20天，待用；

2)稀釋培養(yǎng)：取上述培養(yǎng)的樣品在好氧條件下倍比稀釋?zhuān)?/p>

3)稀釋分離：取上述稀釋的各梯度的菌懸液分別培養(yǎng)于硝化細(xì)菌培養(yǎng)基中于好氧培養(yǎng)箱中10-15℃恒溫培養(yǎng)直至長(zhǎng)出菌落；

4)純化分離：挑取上述稀釋分離后的各梯度單菌落于硝化細(xì)菌培養(yǎng)基中進(jìn)行平板劃線分離，于10-15℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7-14d，得到單菌落；所得菌落進(jìn)行多次平板劃線分離，直至獲得純菌落；

5)檢測(cè)：將上述獲得的純菌落進(jìn)行性能檢測(cè)，選取好氧硝化性能優(yōu)異的菌株，即篩選出好氧硝化細(xì)菌菌株；

所述硝化細(xì)菌培養(yǎng)基為亞硝酸細(xì)菌培養(yǎng)基和硝酸細(xì)菌培養(yǎng)基；