[發(fā)明專利]一種獲取基因重組包涵體粗蛋白的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010202204.5
• 申請(qǐng)日: 2010-06-13
• 公開（公告）號(hào): CN101880312A
• 公開（公告）日: 2010-11-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳顯久;張?zhí)旃?/a>;解軍;牛勃;趙榮瑞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K1/14
• 分類號(hào): C07K1/14
• 代理公司: 山西太原科衛(wèi)專利事務(wù)所 14100
• 代理人: 朱源

1.一種獲取基因重組包涵體粗蛋白的方法，其特征是包括以下步驟：

(1)獲取菌體沉淀：將大腸桿菌表達(dá)外源基因后的培養(yǎng)液在4℃、6000-10000r/min條件下離心15-30min，棄上清液，即獲取含有基因重組包涵體粗蛋白表達(dá)菌的菌體沉淀；

(2)超聲、裂解緩沖液洗滌：將菌體沉淀以體積比為1∶8-12重懸于裂解緩沖液中，所述裂解緩沖液的組分為50mmol/L的Tris-Cl，100mmol/L的NaCl，1mmol/L的乙二胺四乙酸，調(diào)裂解緩沖液的PH值為8.0，然后在冰浴上超聲破菌，超聲波功率為200-300W，每次持續(xù)時(shí)間為1-5s，兩次超聲間隔時(shí)間為1-5s，超聲循環(huán)100-300次，然后以轉(zhuǎn)速為10000-12000r/min，離心8-10min，獲取沉淀；

上述步驟重復(fù)1次，獲取沉淀；

(3)尿素洗滌：將上述所得沉淀以體積比為1∶8-12重懸于3-5mol/L的尿素液中，混懸5-10min，10000-12000r/min條件下離心8-10min，獲取沉淀；

上述步驟重復(fù)2次，獲取沉淀；

(4)脫氧膽酸納洗滌：上述獲取的沉淀以體積比為1∶8-12重懸于3-5％的脫氧膽酸納溶液中，混懸5-10min，7000-9000r/min條件下離心4-8min，獲取沉淀，即獲得包涵體粗蛋白。