[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)蝦過(guò)敏原的免疫膠體金層析試紙條及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010201694.7
• 申請(qǐng)日: 2010-06-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101881769A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-11-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胥傳來(lái);鄧小芳;勇倩倩;馬文蔚;陳蓮君;嚴(yán)文靜;屈昌龍;吳曉玲
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/558
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 無(wú)錫市大為專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 32104
• 代理人: 時(shí)旭丹;劉品超

1.一種檢測(cè)蝦過(guò)敏原-蝦原肌球蛋白的免疫膠體金層析試紙條，其特征在于由樣品墊(3)、膠體金結(jié)合墊(4)、硝酸纖維素膜(2)、吸水墊(5)和PVC背襯(1)組成，PVC背襯一端依次粘貼樣品墊、膠體金結(jié)合墊，中間粘貼硝酸纖維素膜，另一端粘貼吸水墊，膠體金結(jié)合墊上包被了抗蝦原肌球蛋白的簇特異性抗體-膠體金標(biāo)記物，硝酸纖維素膜上依次包被有蝦原肌球蛋白檢測(cè)線(6)和羊抗兔IgG控制線(7)。

2.權(quán)利要求1所述檢測(cè)蝦過(guò)敏原-蝦原肌球蛋白的免疫膠體金層析試紙條的制備方法，其特征在于制備步驟為：

(1)提取純化蝦原肌球蛋白：將蝦肉勻漿，用pH?7.4、0.01M?PBS緩沖溶液浸取24h，用飽和硫酸胺溶液沉淀，4℃、8000g離心15min后收集沉淀溶于pH?7.4、0.01M?PBS緩沖溶液中，然后在該P(yáng)BS緩沖溶液中透析48h脫鹽，最后凝膠柱過(guò)濾，獲得純化的蝦原肌球蛋白；

(2)制備抗蝦原肌球蛋白多克隆抗體：以純化的蝦原肌球蛋白為免疫原，免疫制備抗蝦原肌球蛋白多克隆抗體；

(3)制備膠體金：用檸檬酸三鈉還原劑將氯金酸還原制成20nm-40nm膠體金顆粒；

(4)制備抗蝦原肌球蛋白多克隆抗體-膠體金標(biāo)記物：將3mL膠體金調(diào)至pH?9，攪拌下逐滴加入蛋白濃度為0.075mg/mL的抗蝦原肌球蛋白多克隆抗體0.2mL，放置30min后加入牛血清白蛋白BSA使終質(zhì)量濃度為1％，放置至少30min后，10000rpm離心50min，并用重懸液0.002mol/L、pH?9.0的硼酸鹽緩沖液3mL重懸兩次，最后用0.3mL重懸液重懸，得到抗蝦原肌球蛋白多克隆抗體-膠體金標(biāo)記物；

(5)將抗蝦原肌球蛋白多克隆抗體-膠體金標(biāo)記物包被在膠體金結(jié)合墊上，將蝦原肌球蛋白、羊抗兔IgG分別包被在硝酸纖維素膜上作為檢測(cè)線及控制線，在37℃烘箱干燥；

(6)試紙條的組裝：將樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊由一端依次粘貼在PVC背襯上，即得到用于檢測(cè)蝦過(guò)敏原-蝦原肌球蛋白的免疫膠體金層析試紙條。