[發明專利]白色念珠菌Sap2表位與噬菌體外殼蛋白的雜合蛋白及其應用無效

申請號：	201010200918.2	申請日：	2010-06-10
公開（公告）號：	CN101955544A	公開（公告）日：	2011-01-26
發明（設計）人：	王麗;蘇全平	申請（專利權）人：	東北師范大學
主分類號：	C07K19/00	分類號：	C07K19/00;C12N15/62;G01N33/569;A61K39/00;A61P31/10
代理公司：	長春市東師專利事務所 22202	代理人：	劉延軍;李榮武
地址：	130024 吉***	國省代碼：	吉林;22
權利要求書：	查看更多	說明書：	查看更多
摘要：
搜索關鍵詞：	白色念珠菌 sap2 噬菌體外殼蛋白及其應用
鉆瓜網技術展會專利詞庫專利權人專利榜在售專利公布日期熱門專利

【說明書】：

技術領域

本發明屬于生物工程中的DNA重組技術領域，具體涉及雜合蛋白及其應用。?

背景技術

白色念珠菌是一種寄生于健康宿主皮膚、粘膜的正常菌群。當機體的免疫力下降或者正常菌群平衡被破壞時，會侵入深層組織引起系統性白色念珠菌感染。它是一種酵母樣真菌，在不同條件下能以孢子、酵母和菌絲體等多種形態存在，不同形態表達的抗原也不同。?

隨著腫瘤放療、化療和大量廣譜抗生素的使用，系統性白色念珠菌感染的發病率不斷升高。由于白色念珠菌感染缺少明顯的臨床癥狀，所以導致早期診斷困難。臨床上多采用血培養法，這種方法需要經過反復培養，耗時長、檢出率低，并且通常在感染的晚期才能得到陽性結果，患者往往錯過最佳的治療時機。因此，尋找系統性白色念珠菌感染的早期檢測方法對于該類疾病的診斷和治療是非常重要的。在治療方面，主要采用抗真菌藥物治療，抗真菌藥物不僅價錢貴，而且具有很大的副作用，如腎毒性等。免疫療法被認為是治療真菌感染的有效途徑。?

發明內容

本發明的目的是確立一種白色念珠菌Sap2表位與噬菌體外殼蛋白的雜合蛋白，并且提供該雜合蛋白在制備系統白色念珠菌感染臨床檢測、預防和治療的藥物中的應用。?

本發明采用噬菌體展示技術，將一種白色念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶2(Sap2)的抗原表位基因重組到一種整合有噬菌體主要外殼蛋白基因的表達質粒中，形成重組載體。利用CaCl₂法將重組載體轉化大腸桿菌TG1宿主細胞。外源基因在宿主細胞內表達，與噬菌體外殼蛋白一起組裝而形成一種雜合蛋白，并隨噬菌體分泌到細胞外。利用生物化學方法提取和純化展示有表位的雜合蛋白。?

本發明的雜合蛋白是含有白色念珠菌Sap2表位(SLAQVKYTSASSI)的絲狀噬菌體基因8雜合外殼蛋白。這種雜合蛋白基因的核苷酸序列為：?

atg?aaa?aag?tct?tta?gtc?ctc?aaa?gcc?tcc?gta?gcc?gtt?gct?acc?ctc??48?

gtt?ccg?atg?ctg?tct?ttc?gcc?gcg?gag?ggt?tct?ttg?gct?caa?gtc?aaa???96?

tat?act?tct?gct?tcc?agt?att?cca?tcg?aac?gat?cct?gca?aaa?gcg?gcc???144?

ttt?gac?tcc?ctg?caa?gcc?tca?gcg?acc?gaa?tat?atc?ggt?tat?gcg?tgg???192?

gcg?atg?gtt?gtt?gtc?att?gtc?ggc?gca?act?atc?ggt?atc?aag?ctg?ttt???240?

aag?aaa?ttc?acc?tcg?aaa?gca?agc???????????????????????????????????264?

這種雜合蛋白的氨基酸序列為：?

Met?Lys?Lys?Ser?Leu?Val?Leu?Lys?Ala?Ser?Val?Ala?Val?Ala?Thr?Leu?

1???????????????5???????????????????10??????????????????15?

Val?Pro?Met?Leu?Ser?Phe?Ala?Ala?Glu?Gly?Ser?Leu?Ala?Gln?Val?Lys?

????????????20??????????????????25??????????????????30?