[發明專利]奶牛乳汁孕酮檢測生物傳感器

無效

• 申請號: 201010199744.2
• 申請日: 2010-06-13
• 公開（公告）號: CN101915847A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 張洪友;劉騫;夏成;吳凌;高維明;徐闖;黃海波
• 申請（專利權）人: 黑龍江八一農墾大學
• 主分類號: G01N33/64
• 分類號: G01N33/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.奶牛乳汁孕酮檢測生物傳感器，其特征在于：通過抗原-抗體反應，將孕酮完全抗原修飾于絲網印刷電極上，在絲網印刷電極上建間接競爭ELISA法。

2.根據權利要求1所述的奶牛乳汁孕酮檢測生物傳感器，其特征在于：所述修飾電極的孕酮完全抗原與待測抗原競爭結合孕酮單克隆抗體，辣根過氧化物酶標記第二抗體與孕酮單克隆抗體結合。

3.根據權利要求1或2所述的奶牛乳汁孕酮檢測生物傳感器，其特征在于：用建立在絲網印刷電極上的間接競爭ELISA法定量檢測奶牛乳汁孕酮。

4.根據權利要求1或2所述的奶牛乳汁孕酮檢測生物傳感器，其特征在于：制備方法采用絲網印刷工藝制備三電極結構的電化學傳感器，首先在PET薄膜上印刷銀導電軌道，然后用碳漿印制碳電極，其中直徑3mm的圓盤為工作電極，而半環為對電極，最后，印刷綠色油墨作為絕緣層，僅露出電極和連接處，在用絲網印刷電極制作的工作電極上滴加5μL?P₄-OVA，37℃孵育45min；洗滌液洗滌兩次；用0.5％牛血清白蛋白封閉，在工作電極上滴加50μL，37℃孵育60min；洗滌液洗滌兩次；制備好的生物傳感器置于4℃密閉的環境中備用。

5.根據權利要求3所述的奶牛乳汁孕酮檢測生物傳感器，其特征在于：生物傳感器的使用方法：在工作電極上滴加2.5μL孕酮單克隆抗體和競爭孕酮抗原5μL，37℃作用45min；洗滌液沖洗兩次；滴加酶標二抗，濕盒37℃孵育40min，洗滌液沖洗兩次；在電極上滴加底物TMB-H₂O₂，滴加100uL；用計時電流法測定電化學信號，將所得電流值代入建立的曲線方程求出乳汁樣品中的孕酮含量。