[發明專利]一種O/Asia I型口蹄疫病毒兩價基因工程多肽疫苗及制備方法和用途

有效

• 申請號: 201010199712.2
• 申請日: 2010-06-12
• 公開（公告）號: CN102274496A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 吳曉琰;趙泓;孫玉琨
• 申請（專利權）人: 吳曉琰;趙泓;孫玉琨
• 主分類號: A61K39/135
• 分類號: A61K39/135;C12N1/21;C12N15/62;C12N15/70;C07K19/00;A61P31/14;C12R1/19
• 代理公司: 上海市華誠律師事務所 31210
• 代理人: 李平

技術領域

本發明涉及一種新型的口蹄疫疫苗，特別是一種由基因工程方法生產的O/AsiaⅠ型口蹄疫病毒兩價基因工程多肽疫苗及其制備方法和用途。?

背景技術

國內養殖規模不斷擴大，將成為動物疫苗行業持續增長動力源。目前我國的肉類、蛋類產量均列世界第一位，是世界畜產品生產第一大國。2004年我國全年畜牧業產值首次突破1萬億元大關，畜牧業產值占農業總產值的比重在逐步提高。由于世界范圍內疫情不斷，口蹄疫、禽流感、瘋牛病等，給世界各國的動物疫病防治與控制工作提出了挑戰。口蹄疫(Foot?and?mouth?disease，FMD)是畜牧業中偶蹄類動物(豬、牛、羊及駱駝)的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。迄今為止，世界各國除北美、澳大利亞之外，都曾爆發過口蹄疫的大規模流行。這種疾病的流行曾對德國(1937-1938)、歐洲(1951-1952)、土耳其(1964-1965)、英國(1967-1968)、奧地利(1973)、法國(1974)、韓國(2002)等國家造成巨大的經濟損失。?

口蹄疫的臨床診斷特點為口腔粘膜、蹄部和乳房的皮膚發生水皰和潰爛，由口蹄疫病毒引起，對于畜牧業，豬、牛及羊的飼養及畜產品的貿易危害極大?？谔阋卟《?Foot?and?mouth?disease?virus，FMDV)屬于細小RNA病毒，對豬、牛及羊傳染途徑多，毒力強，一頭病牛的排毒量可感染100萬頭牛，1克病豬蹄部水皰皮可使10萬頭豬感染發病。易于傳播，傳播迅速，流行面廣，生產性能下降，防治費用高，發病率100％，成年畜死亡率一般1-2％，但幼畜高達50％，甚至100％。往往幾個省，幾大洲甚至全球同時發生。直接接觸和間接接觸傳播均可，主要經消化道傳播，還可經呼吸道傳播，往往牛、羊、豬在同一時間內發病，具有感染多種動物的能力以及具有多種抗原形式，流行可呈跳躍式傳播，一年四季均可發生，每隔1-2年或3-5年就流行一次。近年來，豬發生有擴大的趨勢。FMDV的初級復制是在咽部，然后感染鄰近的淋巴結并且進入血流，進而擴散到各種器官和組織中。大?多數情況下，動物感染2-14天出現臨床癥狀。較年長的動物感染FMDV后很少出現死亡，但動物的生殖能力、生長和健康受到很大影響。國際獸疫局將FMDV列為A類烈性傳染病。FMDV一旦發生，難以控制，每次爆發后只能屠宰和集體焚毀染病牲畜以絕后患。由于口蹄疫傳播迅速、難于防治、補救措施少，被稱為畜牧業的“頭號殺手”，對于畜牧業是毀滅性打擊。根據世界動物衛生組織規定，一旦出現口蹄疫疫情，當事國將自動喪失非口蹄疫疫區資格。?

口蹄疫病毒具有顯著的抗原多樣性，目前發現的FMDV有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非1、2、3型)和Asia1(亞洲1型)7個血清型。每種血清型還可以繼續分成多種亞型。中國原為O型口蹄疫流行區。西北及東北地區的周邊國家是O型及AsiaⅠ型口蹄疫流行區。FMDV顆粒中含有一條正鏈極性的、由8500個核苷酸組成的單鏈RNA。病毒顆粒的囊膜包括包繞單鏈RNA的四種結構蛋白VP1(分子量34000)、VP2(分子量30000)、VP3(分子量26000)、VP4(分子量13500)。四種結構蛋白每種60個分子構成一個二十面體病毒粒子。二十面體的頂點由結構蛋白VP1的免疫決定簇區域為141-160區域和200-213區域。?

對于FMD，注射疫苗是目前預防口蹄疫的最有效手段?，F有疫苗及其存在的問題有：?

1、減毒疫苗及滅活疫苗：?

傳統的減毒疫苗及滅活疫苗是利用大量培養動物細胞，然后感染口蹄疫病毒，經過培養、分離病毒，再用化學試劑使病毒滅活后制備而成。法國Merieux公司是最大的滅活FMDV疫苗生產廠家。但制備滅活FMDV需要特殊嚴格的隔離封閉的環境進行生產，以防泄露并污染周圍環境，安全性要求高，這種潛在的危險限制了這種疫苗必須在偏僻的環境生產；此外，疫苗的貯藏運輸保存需要冷鏈，增加成本；滅活FMDV疫苗的效價變動較大，疫苗還存在復強和殘存的痕跡活病毒引起疾病流行和大規模爆發的危險；另外，疫苗的質量還經常會影響奶牛的乳液分泌；使用滅活的FMDV疫苗雖然不常發生過敏性休克或昏迷，但一旦發生就足以造成嚴重后果；最后，首次免疫要2周至2個月內用二次，以后每隔6個月注射一次。免疫預防工作量非常大。?

2、多肽疫苗：?