[發明專利]檢測豬脂肪沉積能力的引物及其方法與應用

有效

• 申請號: 201010196942.3
• 申請日: 2010-06-10
• 公開（公告）號: CN101864487A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 陳宏權;陳華
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;A01K67/02
• 代理公司: 北京雙收知識產權代理有限公司 11241
• 代理人: 王菊珍

技術領域

本發明涉及一種檢測豬脂肪沉積能力的引物及其方法與應用。

背景技術

隨著社會經濟和人們消費水平的提高，改善肉質已經成為適應消費需求和應對畜禽業提高質量與尋求發展的重要議題之一。脂肪含量是影響肉質性狀的一個重要的因素，且在動物維持正常的生理代謝和生理功能中起著非常重要的作用。脂肪是機體的主要成分之一，是維持正常生命活動所必需的物質基礎。合理的脂肪儲備是必須的，但當所攝入的能量超過維持身體正常需要時，多余的能量便被轉化為體脂而沉積下來。在動物體內，脂肪蓄積的組織主要是脂肪組織，維持適當含量的皮下脂肪，可以使胴體的外觀比較好，提高產品等級；適當的肌間脂肪(IMF)可以提高口感，產品的風味、嫩度和多汁性。因此，如何控制胴體脂肪沉積已經成為畜禽遺傳育種學研究的熱點之一。目前利用FSHβ輔助選擇豬產仔數、矮小基因輔助選擇雞的體型等已經取得實質性進展，獲得畜禽經濟性狀的功能基因及其標記，并利用其來加速畜禽重要經濟性狀的育種進展是動物遺傳育種領域的重要創新。由于豬胴體脂肪和瘦肉含量是影響豬肉品種和消費的重要因素，采用分子生物學方法獲得低脂肪、高瘦肉率的豬育種方法沒有實質性突破。

發明內容

本發明的目的是提供一種可用于檢測豬脂肪沉積能力的引物及其方法與應用。

本發明所提供的檢測豬脂肪沉積能力的引物，其核苷酸序列如序列表中序列1和序列2所示。

本發明所提供的檢測豬脂肪沉積能力的方法，是以待測豬基因組DNA為模板，以序列表中序列1和序列2所示的DNA分子為引物，進行PCR擴增，Fnu4HⅠ限制性內切酶酶切PCR擴增產物，檢測Fnu4HⅠ限制性內切酶酶切產物的大小；

當酶切產物含有三條DNA片段，大小分別在200～300bp、100～150bp和小于100bp，待測豬為TP526CC基因型；

當酶切產物含有三條DNA片段，大小分別在200～300bp、150～200bp和小于100bp，待測豬為TP526TT基因型；

當酶切產物含有四條DNA片段，一條DNA片段大小在200～300bp、另一條DNA片段大小小于100bp，其余兩條DNA片段的大小在100～200bp，待測豬為TP526CT基因型；

所述TP526TT基因型的豬脂肪沉積能力小于所述TP526CC基因型的豬或所述TP526CT基因型的豬。

本發明的檢測豬脂肪沉積能力的方法，其中：所述檢測Fnu4HⅠ限制性內切酶酶切產物的大小的方法為瓊脂糖凝膠電泳。

本發明所提供的培育瘦肉型豬的方法，是用所述檢測豬脂肪沉積的方法方法檢測豬，獲得TP526TT基因型的豬，以所述TP526TT基因型的豬為親本進行育種獲得瘦肉型的豬。

本發明檢測豬脂肪沉積的方法，能通過簡單的PCR擴增和酶切確定待測豬的基因型，TP526TT基因型豬的背膘顯著低于TP526CC基因型和TP526CT基因型(P＜0.01)，以TP526TT基因型的豬進行育種可獲得候選的瘦肉型的豬品系。

附圖說明

圖1為Fnu4HⅠ限制性內切酶對PCR產物進行酶切的圖譜。

具體實施方式

實施例、

一、鑒定TP526T/C基因型

提取定遠豬、長白豬等豬基因組DNA。以提取的基因組DNA為模板，TPS和TPA為引物進行PCR擴增，引物TPS和TPA的核苷酸序列如下：

TPS：5′-CACAGCTGGGAAATTGCAG-3′

TPA：5′-CACAATTTCCACGCTGCTAT-3′

PCR擴增體系：總體系25μL，10μM/L?TPS?1.0μL，10μM/L?TPA，1.0μL?10×PCR緩沖液2.5μL，2mM/L?dNTPs?2.0μL，5U/μL?Taq?DNA聚合酶0.5μL，100ng/μL模板1.0μL，其余用超純水補齊。

PCR擴增條件94℃預變性5min；94℃變性30s，56℃退火15s，72℃延伸45s，35個循環，最后72℃延伸10min，4℃保存。

用Fnu4HⅠ限制性內切酶對PCR產物進行酶切。

15μL酶切反應體系：100ng?PCR產物，3U的Fnu4HⅠ限制性內切酶，1.5μL的10×緩沖液，加超純水至15μL。

37℃過夜消化，3％的瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠成像儀分析和拍照，統計基因型。