[發明專利]GPIIIa和COX-1基因SNP檢測液相芯片以及特異性引物

有效

• 申請號: 201010196858.1
• 申請日: 2010-06-08
• 公開（公告）號: CN102010900A
• 公開（公告）日: 2011-04-13
• 發明（設計）人: 許嘉森;秦會娟;余剛;曾濤
• 申請（專利權）人: 廣州益善生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香;曾旻輝

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體的是涉及一種COX-1和GPIIIa基因SNP檢測液相芯片以及特異性引物。

背景技術

血小板膜糖蛋白(Glycoprotein?IIIa，GPIIIa)是主要的血小板整合素和激活劑，它是一種跨膜的糖蛋白復合物。其作用是作為受體，介導纖維蛋白原結合于血小板表面及隨后的血小板聚集。GPIIIa包含人類血小板抗原1(human?platelet?antigen，HPA)或PIA，此基因存在與纖維蛋白原結合的多態性位點，美國一項病例對照研究觀察到GPIIIa基因的白氨酸-33被脯氨酸取代，即HPA-1的T196C突變(Leu33Pro，rs5918，即PLA1/A2異型抗原系統)與急診血栓形成之間有關聯，其預告意義在高血壓、吸煙、高膽固醇血癥或糖尿病等已知冠心病危險因子之上。

環氧合酶(Cyclooxygenase，COX)是花生四烯酸轉化成類花生酸類物質途徑中重要的限速酶，如：前列腺素的合成(Prostaglandins，PGs)。環氧合酶存在兩種同工酶，即為COX-1和COX-2，COX-1(Cyclooxygenase?1)屬于管家酶，又名前列腺素內過氧化物G/H合成酶(prostaglandin?endoperoxide?G/H?synthase，PTGS1)，在機體的各組織中均有表達，它產生的前列腺素參與機體正常的生理過程和保護功能，在大多數正常細胞中都呈穩定表達。一般情況下活性穩定，在應激狀態下或受某些激素、生長因子刺激時，其活性可輕度增加2倍～4倍。COX-1蛋白由576個氨基酸組成，其編碼基因位于染色體9，大小約22kb，含有11個外顯子。有研究表明，攜帶不平衡完全連鎖的C50T和A842G單核苷酸突變的患者，阿司匹林在前列腺素H2合成過程中比正常的基因型起著更大的抑制作用。此外，COX-1的G123A位點多態性與阿司匹林抵抗(Aspirin?Resistance，AR)相關。其中，C50T(rs3842787)位于COX-1的exon2上，A842G(rs10306114)發生在COX-1的啟動子區域，G123A(rs3842788)發生在COX-1的exon3上。

目前對COX-1和GPIIIa多態性檢測的產品一般基于PCR技術的熒光定量PCR法、RFLP法和DNA測序法等，存在靈敏度低，樣品易污染、假陽性率高的缺點，同時由于檢測通量的局限性，不能滿足實際應用的需要。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種GPIIIa基因SNP檢測液相芯片，該液相芯片可用于檢測GPIIIa基因常見基因型T196C的野生型和突變型。

實現上述目的的技術方案如下：

一種GPIIIa基因SNP檢測液相芯片，主要包括有：

(A)針對GPIIIa基因的SNP位點，分別設計的野生型和突變型的ASPE引物對：每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因SNP位點的特異性引物組成，所述特異性引物是：針對GPIIIa基因T196C?SNP位點的SEQ?ID?NO.15和SEQ?ID?NO.16；所述tag序列選自SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.8；

(B)分別包被有特異的anti-tag序列的、具有不同顏色編碼的微球，所述anti-tag序列選自SEQ?ID?NO.17～SEQ?ID?NO.24中的序列，且所述anti-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對，且所述anti-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；

(C)用于擴增出具有T196C?SNP位點的GPIIIa基因目標序列的擴增引物。

優選地，所述擴增引物為針對GPIIIa基因T196C?SNP位點的SEQ?ID?NO.31～SEQ?IDNO.32。

更優選地，所述ASPE引物對為：針對GPIIIa基因T196C?SNP位點的由SEQ?ID?NO.7和SEQID?NO.15組成的序列以及由SEQ?ID?NO.8和SEQ?ID?NO.16組成的序列。

本發明還提供了GPIIIa基因SNP檢測的特異性引物，包括有：針對T196C?SNP位點的野生型和突變型的SEQ?ID?NO.15和SEQ?ID?NO.16。

本發明的另一目的，是提供一種COX-1和GPIIIa基因SNP檢測液相芯片，該液相芯片可以對COX-1和GPIIIa基因進行同步檢測。

具體技術方案如下：