[發(fā)明專利]生物反應(yīng)器組織工程活性人工皮膚產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)含有活化素A的無(wú)血清培養(yǎng)液及其配制方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010196382.1
• 申請(qǐng)日: 2010-06-10
• 公開（公告）號(hào): CN101857853A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱寧文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 朱寧文
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071
• 代理公司: 北京東方匯眾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11296
• 代理人: 朱元萍

1.一種用于大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)皮膚細(xì)胞的含活化素A的培養(yǎng)液，其含有如下組分：細(xì)胞生長(zhǎng)因子3-30ng/mL、胰島素2-30μg/mL、氫化可的松0.2-0.6μg/mL、垂體提取物3-30μg/mL、鈣離子0.5-5.5mmol/L、轉(zhuǎn)鐵蛋白3-30μg/mL、青霉素20-60U/mL、鏈霉素20-60mg/mL、活化素A?0.1-0.9ng/mL。

2.一種用于大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)皮膚細(xì)胞的培養(yǎng)液的配制方法，其特征在于：第一步，將商用的F12粉劑和DMEM粉劑分別配制成F12培養(yǎng)液和DMEM培養(yǎng)液；第二步，將得到的兩種培養(yǎng)液按照F12培養(yǎng)液體積百分?jǐn)?shù)為15-25％、DMEM培養(yǎng)液體積百分?jǐn)?shù)為75-85％且兩者的體積百分?jǐn)?shù)總和為100％的比例進(jìn)行充分混合獲得兩者的混合液，其中所用F12和DMEM培養(yǎng)液的比例分別在上述范圍內(nèi)自由選擇；第三步，在得到的混合液中加入細(xì)胞生長(zhǎng)因子、胰島素、氫化可的松、垂體提取物、可溶鈣鹽、轉(zhuǎn)鐵蛋白、青霉素、鏈霉素和活化素A，使最終得到的混合培養(yǎng)液中各組分的含量如下：細(xì)胞生長(zhǎng)因子3-30ng/mL、胰島素2-30μg/mL、氫化可的松0.2-0.6μg/mL、垂體提取物3-30μg/mL、鈣離子0.5-5.5mmol/L、轉(zhuǎn)鐵蛋白3-30μg/mL、青霉素20-60U/mL、鏈霉素20-60mg/mL、活化素A?0.1-0.9ng/mL。

3.權(quán)利要求2所述的配制方法，其中將商用的F12粉劑配制成F12培養(yǎng)液的方法如下：(1)制備新鮮三蒸水或Millipore超純水；(2)稱取所需量的干粉培養(yǎng)基，加入終體積一半的三蒸水中，磁力攪拌或人工攪拌攪拌使之完全溶解；(3)補(bǔ)加碳酸氫鈉；(4)加水定容到終體積；(5)用1mol/L鹽酸和1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH；(6)用無(wú)菌0.22μm濾膜過濾除菌，分裝于無(wú)菌血清瓶中，4℃冰箱保存；將商用的DMEM粉劑配制成DMEM培養(yǎng)液的方法如下：(1)制備新鮮三蒸水或Millipore超純水；(2)稱取所需量的干粉培養(yǎng)基，加入終體積一半的三蒸水中，磁力攪拌或人工攪拌攪拌使之完全溶解；(3)補(bǔ)加碳酸氫鈉；(4)加水定容到終體積；(5)用1mol/L鹽酸和1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH；(6)用無(wú)菌0.22μm濾膜過濾除菌，分裝于無(wú)菌血清瓶中，4℃冰箱保存。

4.權(quán)利要求3所述的配制方法，其中所述可溶鈣鹽為氯化鈣。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的配制方法制備的細(xì)胞培養(yǎng)液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的培養(yǎng)液在皮膚組織工程大規(guī)模生產(chǎn)培養(yǎng)中的應(yīng)用。

7.活化素A在根據(jù)權(quán)利要求4所述的配制方法中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的培養(yǎng)液在生物反應(yīng)器大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化地進(jìn)行組織工程皮膚的生產(chǎn)培養(yǎng)中的應(yīng)用。