[發(fā)明專利]一種雞肉品質(zhì)分子育種方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010195873.4
• 申請日: 2010-06-10
• 公開（公告）號: CN101892312A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 常國斌;陳國宏;欒德琴;盛中偉;李芹;周瓊;廖菁;龔琳琳;胡國順;陳蓉;劉艷;張穎;洪軍
• 申請（專利權(quán)）人: 揚(yáng)州大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 南京知識律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動物育種學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

目前，我國在研究雞肉品質(zhì)相關(guān)基因多應(yīng)用PCR檢測技術(shù)的方法，具有操作簡單、特異性高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，而且可以直接確定突變的部位和性質(zhì)，因此在多態(tài)性檢測中應(yīng)用很廣。而多位點(diǎn)序列分型(Multilocus?Sequence?Typing，MLST)是一種通過直接測定多個(gè)功能基因的核苷酸序列來發(fā)現(xiàn)基因變異的分型方法，是在普通PCR的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)，具有節(jié)省時(shí)間、降低成本、提高效率的優(yōu)點(diǎn)，特別是節(jié)省珍貴的實(shí)驗(yàn)樣品，因此一經(jīng)提出，即得到眾多研究者的青睞，在生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，多位點(diǎn)序列分型已經(jīng)成為一項(xiàng)成熟而重要的研究手段，然而在雞肉品質(zhì)方面的相關(guān)研究國內(nèi)外還未見報(bào)道。另一方面，優(yōu)質(zhì)雞是我國的特色產(chǎn)業(yè)，是保護(hù)、開發(fā)以及利用我國豐富雞遺傳資源的主要途徑，但是優(yōu)質(zhì)雞育種中存在肉品質(zhì)性狀表型選擇遺傳進(jìn)展慢、育種效率低等問題，本專利在已有研究的基礎(chǔ)上，以影響肌苷酸含量的候選基因(GARS-AIRS-GART)(Genebank登錄號：AY665560)和影響肌內(nèi)脂肪含量的候選基因(A-FABP-3、Ex-FABP-3)(Genebank登錄號分別為：AY545055、DQ078254)為研究對象，利用多位點(diǎn)序列分型技術(shù)，對相關(guān)功能基因同時(shí)進(jìn)行多個(gè)位點(diǎn)的多型檢測，并結(jié)合標(biāo)記輔助育種方法，建立一?套具有自主知識產(chǎn)權(quán)的肉品質(zhì)分子育種技術(shù)體系，為優(yōu)質(zhì)雞專門化品系和配套系的選育提供技術(shù)支撐。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是對多個(gè)影響雞肉品質(zhì)的候選基因同時(shí)進(jìn)行序列分型。?

本發(fā)明的技術(shù)方案是：首先組建優(yōu)質(zhì)白耳雞基礎(chǔ)群，在2周齡采集血樣對影響肌苷酸含量的候選基因(GARS-AIRS-GART)和肌內(nèi)脂肪含量的候選基因(A-FABP-3、Ex-FABP-3)的進(jìn)行多位點(diǎn)序列分型檢測，通過多個(gè)候選基因的核苷酸序列變異來確定有利基因型，進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇，從而加快遺傳進(jìn)展，提高肉品質(zhì)性狀的育種效率。?

附圖說明

圖1是Ex-FABP基因的變性膠電泳圖，其中AA：3，6，8，9，11；BB：1；CC：12；AB：2，10；AC：5，7；BC：4。?

圖2是A-FABP基因的變性膠電泳圖，其中AA：5；BB：1，3；AB：2，4，6?

圖3是GARS-AIRS-GART基因的變性膠電泳圖，其中TT：1，4；CC：2，3，6，7；CT：5?

圖4是本發(fā)明育種方法的流程示意圖。?

具體技術(shù)路線如下：?

1?材料與方法?

1.1.組建優(yōu)質(zhì)雞基礎(chǔ)群?

以現(xiàn)有優(yōu)質(zhì)白耳雞群為基礎(chǔ)，綜合考慮羽色(黃羽、麻羽)、體重等性狀，組建優(yōu)質(zhì)雞基礎(chǔ)群。?

1.2?試驗(yàn)材料?

采集2周齡雞只的翅靜脈血，常規(guī)酚/氯仿法提取DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?

1.3肉品質(zhì)性狀分子標(biāo)記基因型檢測?

對已組建的基礎(chǔ)群，采用PCR-SSCP和PCR-RFLP等分析技術(shù)，對肌苷酸含量相關(guān)候選基因(GARS-AIRS-GART)和肌內(nèi)脂肪相關(guān)候選基因(A-FABP-3、Ex-FABP-3)進(jìn)行檢測，鑒定個(gè)體基因型并測定相應(yīng)優(yōu)勢基因型的肌內(nèi)脂肪含量和肌苷酸含量，進(jìn)而確定用于多位點(diǎn)序列分型的選育群。?

結(jié)果發(fā)現(xiàn)：?

(1)Ex-FABP基因在外顯子均沒有檢測到SNP突變(SNP：單核苷酸的多態(tài)性)，在內(nèi)含子3檢測到C3654T、C3699T、A3700G?3個(gè)SNP突變，共6種基因型，將Ex-FABP-3純合型分別定義為AA、BB和CC型，雜合型定義為AB、AC和BC型(楊霞.雞Ex-FABP基因單核苷酸多態(tài)性及其與脂肪性狀的相關(guān)研究[D].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006)，不同基因型的變性凝膠電泳圖如圖1，而其中BB型的雞種肌內(nèi)脂肪含量是最高的(表1)；?

表1.白耳雞Ex-FABP不同基因型肌內(nèi)脂肪含量(單位：％)?

(2)A-FABP基因外顯子3(A-FABP-3)檢測到A1763G的SNP突變，將其的純和型分別定義為AA、BB型，雜合型定義為AB，(羅桂芬，陳繼蘭，文杰，趙桂蘋，鄭麥青，孫世鐸.雞A-FABP基因多態(tài)性?分析及其與脂肪性狀的相關(guān)研究[J].2006，28(1)：39-42：)而其中AA型的雞種肌內(nèi)脂肪含量是最高的(表2)；?

表2.白耳雞A-FABP不同基因型肌內(nèi)脂肪含量(單位：％)?