[發明專利]一種雞肉品質分子育種方法

無效

• 申請號: 201010195873.4
• 申請日: 2010-06-10
• 公開（公告）號: CN101892312A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發明（設計）人: 常國斌;陳國宏;欒德琴;盛中偉;李芹;周瓊;廖菁;龔琳琳;胡國順;陳蓉;劉艷;張穎;洪軍
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明屬于動物育種學和分子生物學領域。?

背景技術

目前，我國在研究雞肉品質相關基因多應用PCR檢測技術的方法，具有操作簡單、特異性高、重復性好等優點，而且可以直接確定突變的部位和性質，因此在多態性檢測中應用很廣。而多位點序列分型(Multilocus?Sequence?Typing，MLST)是一種通過直接測定多個功能基因的核苷酸序列來發現基因變異的分型方法，是在普通PCR的基礎上加以改進，具有節省時間、降低成本、提高效率的優點，特別是節省珍貴的實驗樣品，因此一經提出，即得到眾多研究者的青睞，在生命科學的各個領域，多位點序列分型已經成為一項成熟而重要的研究手段，然而在雞肉品質方面的相關研究國內外還未見報道。另一方面，優質雞是我國的特色產業，是保護、開發以及利用我國豐富雞遺傳資源的主要途徑，但是優質雞育種中存在肉品質性狀表型選擇遺傳進展慢、育種效率低等問題，本專利在已有研究的基礎上，以影響肌苷酸含量的候選基因(GARS-AIRS-GART)(Genebank登錄號：AY665560)和影響肌內脂肪含量的候選基因(A-FABP-3、Ex-FABP-3)(Genebank登錄號分別為：AY545055、DQ078254)為研究對象，利用多位點序列分型技術，對相關功能基因同時進行多個位點的多型檢測，并結合標記輔助育種方法，建立一?套具有自主知識產權的肉品質分子育種技術體系，為優質雞專門化品系和配套系的選育提供技術支撐。?

發明內容

本發明的目的是對多個影響雞肉品質的候選基因同時進行序列分型。?

本發明的技術方案是：首先組建優質白耳雞基礎群，在2周齡采集血樣對影響肌苷酸含量的候選基因(GARS-AIRS-GART)和肌內脂肪含量的候選基因(A-FABP-3、Ex-FABP-3)的進行多位點序列分型檢測，通過多個候選基因的核苷酸序列變異來確定有利基因型，進行標記輔助選擇，從而加快遺傳進展，提高肉品質性狀的育種效率。?

附圖說明

圖1是Ex-FABP基因的變性膠電泳圖，其中AA：3，6，8，9，11；BB：1；CC：12；AB：2，10；AC：5，7；BC：4。?

圖2是A-FABP基因的變性膠電泳圖，其中AA：5；BB：1，3；AB：2，4，6?

圖3是GARS-AIRS-GART基因的變性膠電泳圖，其中TT：1，4；CC：2，3，6，7；CT：5?

圖4是本發明育種方法的流程示意圖。?

具體技術路線如下：?

1?材料與方法?

1.1.組建優質雞基礎群?

以現有優質白耳雞群為基礎，綜合考慮羽色(黃羽、麻羽)、體重等性狀，組建優質雞基礎群。?

1.2?試驗材料?

采集2周齡雞只的翅靜脈血，常規酚/氯仿法提取DNA，-20℃保存備用。?

1.3肉品質性狀分子標記基因型檢測?

對已組建的基礎群，采用PCR-SSCP和PCR-RFLP等分析技術，對肌苷酸含量相關候選基因(GARS-AIRS-GART)和肌內脂肪相關候選基因(A-FABP-3、Ex-FABP-3)進行檢測，鑒定個體基因型并測定相應優勢基因型的肌內脂肪含量和肌苷酸含量，進而確定用于多位點序列分型的選育群。?

結果發現：?

(1)Ex-FABP基因在外顯子均沒有檢測到SNP突變(SNP：單核苷酸的多態性)，在內含子3檢測到C3654T、C3699T、A3700G?3個SNP突變，共6種基因型，將Ex-FABP-3純合型分別定義為AA、BB和CC型，雜合型定義為AB、AC和BC型(楊霞.雞Ex-FABP基因單核苷酸多態性及其與脂肪性狀的相關研究[D].四川農業大學，2006)，不同基因型的變性凝膠電泳圖如圖1，而其中BB型的雞種肌內脂肪含量是最高的(表1)；?

表1.白耳雞Ex-FABP不同基因型肌內脂肪含量(單位：％)?

(2)A-FABP基因外顯子3(A-FABP-3)檢測到A1763G的SNP突變，將其的純和型分別定義為AA、BB型，雜合型定義為AB，(羅桂芬，陳繼蘭，文杰，趙桂蘋，鄭麥青，孫世鐸.雞A-FABP基因多態性?分析及其與脂肪性狀的相關研究[J].2006，28(1)：39-42：)而其中AA型的雞種肌內脂肪含量是最高的(表2)；?

表2.白耳雞A-FABP不同基因型肌內脂肪含量(單位：％)?