[發明專利]食品和飲料中胡蘿卜成分快速檢測試劑盒的制備和檢測方法

有效

• 申請號: 201010195092.5
• 申請日: 2010-05-27
• 公開（公告）號: CN101921836A
• 公開（公告）日: 2010-12-22
• 發明（設計）人: 孫敏;高宏偉;梁君妮;肖西志
• 申請（專利權）人: 山東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種胡蘿卜成分快速檢測試劑盒，其特征在于其中的試劑包括(1)-(3)：

(1)PCR擴增反應液A

包括10×PCR反應緩沖液、0.1-0.4mmol/L?dNTP(含dUTP)、2-4mmol/L硫酸鎂、1-2U?Taq酶、0.2-0.5U?UNG酶、0.2-0.6μmol/L上游引物、0.2-0.6μmol/L下游引物′、0.2-0.6μmol/L?TaqMan探針；

其中10×PCR反應緩沖液含有100mmol/L?pH8.8的三羥基甲基氨基甲烷—鹽酸、500mmol/L氯化鉀和1％曲拉通X-100；

其中上游引物序列為：5′-CGACAAGCAAGCTTTACTCCAA-3′、下游引物序列為：5′-CGTCTGACACCCATGAGTCTGT-3′；

其中TaqMan探針序列為：5′-TCAAAACAGCCTTGAAAAACCCCACCA-3′，其5′端標記FAM報告熒光集團，3′端標記TAMRA淬滅熒光集團；

(2)UNG酶：1U/μL；

(3)Taq酶：5U/μL。

2.根據權利要求1中所述的胡蘿卜成分快速檢測試劑盒，其特征是上述的上游引物、下游引物、TaqMan探針的體積比為：1∶1∶1。

3.根據權利要求1中所述的胡蘿卜成分快速檢測試劑盒，其特征是上述的dNTP內的四種脫氧核糖核酸的質量比為dUTP∶dATP∶dGTP∶dCTP＝2∶1∶1∶1。

4.一種使用如權利要求1所述的試劑盒快速檢測胡蘿卜成分的方法，其特征是依次包括下列步驟：

(1)待檢樣品DNA的提取；

(2)胡蘿卜成分的實時熒光PCR擴增：

A.在裝有如權利要求1所述的PCR擴增反應液A的反應管中加入0.2μL?UNG酶、0.3μL?Taq酶和1μL待檢樣品DNA，混勻；

B.將PCR反應管放入熒光PCR儀，按下述反應條件完成PCR擴增：

50℃2min，1個循環，激活UNG酶；

94-95℃4min，1個循環，滅活UNG酶，預變性；

94-95℃10-20sec；60℃20-40sec，45個循環，PCR擴增；

(3)應用熒光定量PCR儀隨機軟件，分析擴增結果。