[發(fā)明專利]一種3′，5′-環(huán)腺苷單磷酸的結(jié)晶方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010191528.3
• 申請(qǐng)日: 2010-06-04
• 公開（公告）號(hào): CN102268057A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 應(yīng)漢杰;錢文斌;陳勇;陳曉春;柏建新;熊健;林曉清
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07H19/213
• 分類號(hào): C07H19/213;C07H1/06
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11280
• 代理人: 曹津燕

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于結(jié)晶技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸的結(jié)晶方法。?

背景技術(shù)

3′，5’-環(huán)磷酸腺苷(3′，5′-cyclic?adenosine?monophosphate)是蛋白激酶致活劑，是核苷酸的衍生物。3′，5’-環(huán)磷酸腺苷是在人體內(nèi)廣泛存在的一種具有生理活性的重要物質(zhì)，由三磷酸腺苷在腺苷環(huán)化酶催化下生成，能調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種功能活動(dòng)。作為激素的第二信使，在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮激素調(diào)節(jié)生理機(jī)能和物質(zhì)代謝作用，能改變細(xì)胞膜的功能，促使網(wǎng)織肌漿質(zhì)內(nèi)的鈣離子進(jìn)入肌纖維，從而增強(qiáng)心肌收縮，并可促進(jìn)呼吸鏈氧化酶的活性，改善心肌缺氧，緩解冠心病癥狀及改善心電圖。此外，對(duì)糖、脂肪代謝、核酸、蛋白質(zhì)的合成調(diào)節(jié)等起著重要的作用。?

目前有關(guān)3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸結(jié)晶的研究鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。在2000年出的版的《最新生化藥物制備技術(shù)》中報(bào)道，在化學(xué)合成的3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸結(jié)晶工藝，加等體積的95％乙醇，用2mol/L鹽酸調(diào)pH1～2，即析出白色結(jié)晶，過濾，取結(jié)晶干燥，得成品cAMP，母液回收，收率62.48％。由于化學(xué)合成過程中添加了如吡啶、三氯氧磷等毒性較大的試劑，且反應(yīng)不完全，副產(chǎn)物多，最終導(dǎo)致后續(xù)分離結(jié)晶收率很低。另外，在中國(guó)專利CN1702076A中公開了直接用冷凍干燥法對(duì)3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸濃縮液進(jìn)行結(jié)晶，但由于冷凍干燥法僅能除去溶液中的水分，雖然收率為100％，但產(chǎn)品的純度并沒有進(jìn)一步提升，且真空冷凍干燥設(shè)備投資大，能源消耗成本較高，限制了該技術(shù)的工業(yè)化應(yīng)用。?

發(fā)明內(nèi)容

3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸上的磷酸基的解離平衡常數(shù)的pK值為3.3～3.9，調(diào)節(jié)溶液的pH即可改變它的存在形式，如下式，當(dāng)pH＞pK時(shí)，3’，5’-環(huán)腺?苷單磷酸上的磷酸基將與堿反應(yīng)生成對(duì)應(yīng)的3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸鹽，當(dāng)pH＜pK時(shí)，3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸鹽將與酸反應(yīng)生成3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸。?

cAMP·H⁺+NaOH＝cAMP·Na⁺+H₂O?

cAMP·Na⁺+HCl＝cAMP·H⁺+NaCl?

因此，本發(fā)明的目的是提供一種新的高收率的3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸的結(jié)晶方法，采用反應(yīng)-低溫相結(jié)合的結(jié)晶技術(shù)取代溶劑強(qiáng)析方法和冷凍干燥方法，以克服現(xiàn)有3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸結(jié)晶技術(shù)中產(chǎn)品質(zhì)量差，收率低的缺點(diǎn)。?

本發(fā)明的目的是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明提供一種3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸的結(jié)晶方法，所述方法包括以下步驟：1)將3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸水溶液與堿進(jìn)行反應(yīng)，生成3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸鹽溶液；2)將步驟1)中反應(yīng)生成的3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸鹽溶液與酸進(jìn)行反應(yīng)，生成3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸；3)于0～15℃，優(yōu)選為0～10℃，更優(yōu)選為5～10℃下保存步驟2)中反應(yīng)生成的3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸，即得。?

優(yōu)選地，所述步驟1)中3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸水溶液與堿進(jìn)行反應(yīng)，直至溶液pH值為pH?6.0～10.0，優(yōu)選為pH?6.0～9.0，更優(yōu)選為pH?6.5～8.0。?

優(yōu)選地，所述堿選自氨水和氫氧化鈉溶液中的一種或幾種，其濃度為2～10M，優(yōu)選為3～6M，更優(yōu)選為3～5M。?

優(yōu)選地，所述步驟1)中的3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸水溶液的濃度為15～350g/L，優(yōu)選為150～200g/L。?

優(yōu)選地，所述步驟2)中的反應(yīng)溫度為10～40℃，優(yōu)選為15～35℃，更優(yōu)選為30～35℃。?

優(yōu)選地，所述步驟2)中3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸鹽溶液與酸進(jìn)行反應(yīng)，直至溶液pH值為pH?1.0～3.5，優(yōu)選為pH?1.5～3.0，更優(yōu)選為pH?2.0～2.5。?

優(yōu)選地，所述酸選自硫酸、鹽酸和磷酸中的一種或幾種，其濃度為0.01～10M，優(yōu)選為0.05～8M，更優(yōu)選為2～4M；?

優(yōu)選地，所述步驟2)中的酸以按3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸鹽溶液體積的0.01～0.5％/min的流速，優(yōu)選為0.04～0.4％/min，更優(yōu)選為0.1～0.4％/min的流速緩慢加入至3’，5’-環(huán)腺苷單磷酸鹽溶液中。?

優(yōu)選地，所述步驟2)中加入酸的過程中還包括以20～250rpm的攪拌速度，優(yōu)選為90～200rpm，更優(yōu)選為100～150rpm的攪拌速度進(jìn)行攪拌。?