[發明專利]松乳菇菌絲深層發酵培養基及其應用

有效

• 申請號: 201010189931.2
• 申請日: 2010-06-02
• 公開（公告）號: CN102267833A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發明（設計）人: 李益;王慧明
• 申請（專利權）人: 湖南民康生物技術研究所
• 主分類號: C05G3/00
• 分類號: C05G3/00
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 盧宏

技術領域：

本發明涉及到一種培養液，具體是松乳菇菌絲深層發酵的一種培養基。同時，本發明還涉及利用該培養基培養松乳菇后所獲得的產物的應用。

背景技術

液體深層發酵是食(藥)用菌菌絲培養的一種常用方法。它是將菌種接種于發酵罐或錐形瓶的培養液中，在自動控制理化調節下，通過不斷同期攪拌或振蕩，使菌種在液體深層處快速繁殖的方法。在液體深層培養中，菌絲細胞能在反應器內處于最適宜的溫度、酸堿度、氧氣和碳氮比等環境中生長，呼吸作用所產生的代謝廢氣又能及時排放，因此新陳代謝旺盛，菌絲生長分裂迅速，能在短時間內產生大量的菌絲體。液體深層發酵是獲取大量松乳菇多糖的有效途徑。與其它發酵研究一樣，食用菌的發酵培養基包括碳源、氮源、無機鹽、生長因子等，國內學者對松乳菇的發酵條件與工藝進行了研究，但結果很不一致。多數研究表明松乳菇菌絲在以葡萄糖、蔗糖、糊精、甘露醇等為碳源、以玉米漿、牛肉膏、硝酸銨等為氮源的培養基上生長好，礦質鹽MgSO₄和NaCl使菌絲啟動加快，磷酸二氫鉀使菌絲產量提高；VB1、VB6、煙酸對菌絲的生長有促進作用，適宜的培養溫度25～27℃，pH6～7.5。目前常用松乳菇基礎培養基成分為：玉米漿1.5％，硝酸銨0.15％，羧甲基纖維素鈉0.4％，葡萄糖1.5％，PH6.5。

以上研究為松乳菇的開發利用提供了基礎，但目前液體深層發酵技術得到的松乳菇菌絲量少，多糖的分離純化技術不成熟，多糖得率很低。

發明內容

本發明對松乳菇菌絲深層發酵培養基進行改進優化，通過在發酵液體培養液中添加中藥材進行深層發酵，提高菌絲及胞內多糖產量，同時改善多糖成份，增強多糖的藥理活性。

本發明提供的松乳菇菌培養基是在基礎培養基的基礎上，加入一種或多種中草藥。

上述中藥材中優選白術、甘草、天花粉、大棗、玉竹、麥冬、黨參、粉葛、百合、當歸、淮山。

根據本發明的實施例，更優選麥冬、淮山、大棗、玉竹。

本發明根據生物體生物酶作用機制和產物的累積作用，在普通培養基中添加中藥材，提高松乳菇菌絲及其多糖的生物產量，并改善多糖成份，增強藥理活性。經對添加14種中草藥的初篩試驗表明，培養基添加多糖類中藥材可促進松乳菇菌絲生長，提高多糖產量。進而挑選麥冬、淮山、大棗三種促進作用強的中藥材進行重復試驗，再次發現菌絲生長量及多糖含量均顯著高于基礎培養基的產量；同時經組分分析發現添加這三種中藥材菌絲多糖組分明顯改變，經抗菌和抗病毒的藥理試驗證明藥理作用增強。

中藥材最好以均漿的形式加入，以擴大中草藥與松乳菇菌絲的接觸面積，產生的菌絲體或菌絲體中多糖的含量與加入中草藥的量成正比。但是，加入到液體培養基中中草藥的比例有一定的限制，量過多，則培養液容易成團或凝固，不利于菌絲充分發酵。對于麥冬、淮山、大棗優選其占培養基的重量體積濃度為0.5-5％，更優選2-3％。

本發明的優點和積極效果：

本發明從中藥材中篩選出14種富含糖類的中草材，添加到松乳菇發酵液中，能提高松乳菇菌絲及其胞內多糖的產量，并增強其多糖的藥理(抑菌等)活性。

本發明所選擇的中藥材本身富含多糖，松乳菇菌絲在生長過程中可能對這些多糖直接吸收利用或通過修飾改造后整合到松乳菇菌絲胞內多糖的組分中，使得松乳菇菌絲胞內多糖含量從26％提高到48.5％；

本發明使松乳菇多糖的藥理功能也發生相應的改變。如原松乳菇胞內多糖對大腸桿菌、沙門氏菌、鏈球菌和巴氏桿菌的MIC分別為25mg/ml、12.5mg/ml、3.175mg/ml、25mg/ml，添加了麥冬、淮山和大棗所得到的菌絲胞內多糖對四種細菌的MIC除了對鏈球菌有所提高或相同外，其余均有所降低，表明通過添加中草藥，可以提高松乳菇菌絲胞內多糖的抗菌能力。經雞胚雞新城疫病毒和雞法氏囊病毒感染抑制試驗證明：添加麥冬、淮山或大棗發酵的松乳菇多糖與未添加中藥發酵的松乳菇多糖比，顯著提高感染雞胚的存活時間，且有約30％的雞胚存活。這種藥效提高可能是松乳菇菌絲體一方面同化吸納了中藥中的藥理活性成分，即藥效疊加；另一方面菌絲體異化作用對中藥成份進行修飾，將非活性多糖成分改造成活性成份，將低活性成份改造成高活性成份。

本發明篩選出的添加中藥材來源廣，產量高、價格低，為大規模地生產高活性松乳菇多糖提供技術和物質保障。本發明利用富含糖類的中藥材添加發酵松乳菇，既提高了松乳菇菌絲多糖的含量，也提高了松乳菇菌絲多糖的藥理活性。

具體實施方式