[發(fā)明專利]松乳菇菌絲深層發(fā)酵培養(yǎng)基及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010189931.2
• 申請(qǐng)日: 2010-06-02
• 公開（公告）號(hào): CN102267833A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李益;王慧明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南民康生物技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): C05G3/00
• 分類號(hào): C05G3/00
• 代理公司: 長(zhǎng)沙正奇專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 43113
• 代理人: 盧宏

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及到一種培養(yǎng)液，具體是松乳菇菌絲深層發(fā)酵的一種培養(yǎng)基。同時(shí)，本發(fā)明還涉及利用該培養(yǎng)基培養(yǎng)松乳菇后所獲得的產(chǎn)物的應(yīng)用。

背景技術(shù)

液體深層發(fā)酵是食(藥)用菌菌絲培養(yǎng)的一種常用方法。它是將菌種接種于發(fā)酵罐或錐形瓶的培養(yǎng)液中，在自動(dòng)控制理化調(diào)節(jié)下，通過不斷同期攪拌或振蕩，使菌種在液體深層處快速繁殖的方法。在液體深層培養(yǎng)中，菌絲細(xì)胞能在反應(yīng)器內(nèi)處于最適宜的溫度、酸堿度、氧氣和碳氮比等環(huán)境中生長(zhǎng)，呼吸作用所產(chǎn)生的代謝廢氣又能及時(shí)排放，因此新陳代謝旺盛，菌絲生長(zhǎng)分裂迅速，能在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量的菌絲體。液體深層發(fā)酵是獲取大量松乳菇多糖的有效途徑。與其它發(fā)酵研究一樣，食用菌的發(fā)酵培養(yǎng)基包括碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)松乳菇的發(fā)酵條件與工藝進(jìn)行了研究，但結(jié)果很不一致。多數(shù)研究表明松乳菇菌絲在以葡萄糖、蔗糖、糊精、甘露醇等為碳源、以玉米漿、牛肉膏、硝酸銨等為氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)好，礦質(zhì)鹽MgSO₄和NaCl使菌絲啟動(dòng)加快，磷酸二氫鉀使菌絲產(chǎn)量提高；VB1、VB6、煙酸對(duì)菌絲的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，適宜的培養(yǎng)溫度25～27℃，pH6～7.5。目前常用松乳菇基礎(chǔ)培養(yǎng)基成分為：玉米漿1.5％，硝酸銨0.15％，羧甲基纖維素鈉0.4％，葡萄糖1.5％，PH6.5。

以上研究為松乳菇的開發(fā)利用提供了基礎(chǔ)，但目前液體深層發(fā)酵技術(shù)得到的松乳菇菌絲量少，多糖的分離純化技術(shù)不成熟，多糖得率很低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明對(duì)松乳菇菌絲深層發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行改進(jìn)優(yōu)化，通過在發(fā)酵液體培養(yǎng)液中添加中藥材進(jìn)行深層發(fā)酵，提高菌絲及胞內(nèi)多糖產(chǎn)量，同時(shí)改善多糖成份，增強(qiáng)多糖的藥理活性。

本發(fā)明提供的松乳菇菌培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入一種或多種中草藥。

上述中藥材中優(yōu)選白術(shù)、甘草、天花粉、大棗、玉竹、麥冬、黨參、粉葛、百合、當(dāng)歸、淮山。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，更優(yōu)選麥冬、淮山、大棗、玉竹。

本發(fā)明根據(jù)生物體生物酶作用機(jī)制和產(chǎn)物的累積作用，在普通培養(yǎng)基中添加中藥材，提高松乳菇菌絲及其多糖的生物產(chǎn)量，并改善多糖成份，增強(qiáng)藥理活性。經(jīng)對(duì)添加14種中草藥的初篩試驗(yàn)表明，培養(yǎng)基添加多糖類中藥材可促進(jìn)松乳菇菌絲生長(zhǎng)，提高多糖產(chǎn)量。進(jìn)而挑選麥冬、淮山、大棗三種促進(jìn)作用強(qiáng)的中藥材進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，再次發(fā)現(xiàn)菌絲生長(zhǎng)量及多糖含量均顯著高于基礎(chǔ)培養(yǎng)基的產(chǎn)量；同時(shí)經(jīng)組分分析發(fā)現(xiàn)添加這三種中藥材菌絲多糖組分明顯改變，經(jīng)抗菌和抗病毒的藥理試驗(yàn)證明藥理作用增強(qiáng)。

中藥材最好以均漿的形式加入，以擴(kuò)大中草藥與松乳菇菌絲的接觸面積，產(chǎn)生的菌絲體或菌絲體中多糖的含量與加入中草藥的量成正比。但是，加入到液體培養(yǎng)基中中草藥的比例有一定的限制，量過多，則培養(yǎng)液容易成團(tuán)或凝固，不利于菌絲充分發(fā)酵。對(duì)于麥冬、淮山、大棗優(yōu)選其占培養(yǎng)基的重量體積濃度為0.5-5％，更優(yōu)選2-3％。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果：

本發(fā)明從中藥材中篩選出14種富含糖類的中草材，添加到松乳菇發(fā)酵液中，能提高松乳菇菌絲及其胞內(nèi)多糖的產(chǎn)量，并增強(qiáng)其多糖的藥理(抑菌等)活性。

本發(fā)明所選擇的中藥材本身富含多糖，松乳菇菌絲在生長(zhǎng)過程中可能對(duì)這些多糖直接吸收利用或通過修飾改造后整合到松乳菇菌絲胞內(nèi)多糖的組分中，使得松乳菇菌絲胞內(nèi)多糖含量從26％提高到48.5％；

本發(fā)明使松乳菇多糖的藥理功能也發(fā)生相應(yīng)的改變。如原松乳菇胞內(nèi)多糖對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、鏈球菌和巴氏桿菌的MIC分別為25mg/ml、12.5mg/ml、3.175mg/ml、25mg/ml，添加了麥冬、淮山和大棗所得到的菌絲胞內(nèi)多糖對(duì)四種細(xì)菌的MIC除了對(duì)鏈球菌有所提高或相同外，其余均有所降低，表明通過添加中草藥，可以提高松乳菇菌絲胞內(nèi)多糖的抗菌能力。經(jīng)雞胚雞新城疫病毒和雞法氏囊病毒感染抑制試驗(yàn)證明：添加麥冬、淮山或大棗發(fā)酵的松乳菇多糖與未添加中藥發(fā)酵的松乳菇多糖比，顯著提高感染雞胚的存活時(shí)間，且有約30％的雞胚存活。這種藥效提高可能是松乳菇菌絲體一方面同化吸納了中藥中的藥理活性成分，即藥效疊加；另一方面菌絲體異化作用對(duì)中藥成份進(jìn)行修飾，將非活性多糖成分改造成活性成份，將低活性成份改造成高活性成份。

本發(fā)明篩選出的添加中藥材來(lái)源廣，產(chǎn)量高、價(jià)格低，為大規(guī)模地生產(chǎn)高活性松乳菇多糖提供技術(shù)和物質(zhì)保障。本發(fā)明利用富含糖類的中藥材添加發(fā)酵松乳菇，既提高了松乳菇菌絲多糖的含量，也提高了松乳菇菌絲多糖的藥理活性。

具體實(shí)施方式