[發明專利]重組細胞球蛋白在延緩皮膚衰老中的應用

無效

• 申請號: 201010189909.8
• 申請日: 2010-06-02
• 公開（公告）號: CN102268085A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發明（設計）人: 許瑞安;張亭亭;李招發;刁勇
• 申請（專利權）人: 許瑞安
• 主分類號: C07K14/795
• 分類號: C07K14/795;C07K1/18;C07K1/16;C12N1/21;C12P21/00;A61K38/41;A61P17/00;A61P39/06;A61P29/00;A61P17/02
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所 11130
• 代理人: 楊厚;王為

技術領域：

本發明屬于生物技術領域，涉及重組大鼠細胞球蛋白在延緩皮膚衰老中的應用。?

背景技術：

衰老是機體各種組織、器官功能隨年齡增長所發生的退行性變化。衰老與人類壽命和死亡密切相關，它是一個復雜的生理過程，涉及諸多領域，是機體各種生化反應的綜合表現，同時也是體內外許多因素共同作用的結果。衰老導致生物有機體對各種應激的抵抗能力降低，生物功能進行性衰退，同時更易受到各種疾病的影響。覆蓋機體全身的皮膚是機體衰老過程中最為明顯的器官之一。隨著年齡的增長，皮膚會發生退行性變，表現為皮膚變薄、含水量減少、萎縮、起皺、彈性降低等。有關衰老的機理，學者們曾提出許多學說。?

皮膚衰老分為兩種類型：自然衰老，即隨年代增長造成的生理性衰老和光老化，即由外界環境因素主要是紫外線(ultraviolet，UV)照射引起的衰老。現已提出一系列衰老學說，主要包括自由基學說、線粒體DNA損傷學說、衰老的端區學說、免疫學說(immunological?theory)、光老化學說、內分泌學說(endocrine?theory)等。衰老的皮膚中，由于MMPs(基質金屬蛋白酶)的表達量提高或者活性增強，造成細胞外基質重要組成成分膠原(Ⅰ型和Ⅲ型膠原為主)和彈性蛋白發生進行性退化。MMPs表達過量和對細胞外基質重建發揮重要作用的基質金屬蛋白酶抑制劑(Tissue?inhibitor?of?MMP，TIMPs)表達量降低，是皮膚衰老的兩個重要特征。皮膚衰老的組織學改變主要是膠原蛋白減少和彈性纖維增加；分子學改變主要包括表皮增生和分化性標志表達異常。外界環境中UV照射對人類皮膚結締組織產生嚴重損傷，光老化導致細胞活力降低，細胞膜損傷和彈性組織變性(彈性蛋白/原纖維蛋白沉積)。與光老化皮膚外觀上相比較，自然衰老的皮膚更薄，色素沉積更加均勻，更加松弛而且細紋相對較多。?

細胞球蛋白(Cytoglobin，Cygb)，是近幾年來在脊椎動物中發現的六配位血紅素球蛋白(hxHb)超家族中的新成員，在多種生物及組織中表達。已有多項研究初步表明，細胞球蛋白Cygb可能具有促進皮膚等上皮組織的生長、減緩衰老、抗氧化和抗炎癥等?功能。?

發明人通過構建基因工程菌pET22b-Cygb/E.coli.BL21，篩選高表達大鼠Cygb菌株，分離純化鑒定得到高純度重組大鼠Cygb。利用皮膚細胞H₂O₂氧化應激損傷模型及D-galactose致小鼠局部皮膚衰老模型等，研究了Cygb的在延緩皮膚衰老中的抗氧化及相關功能，探討了Cygb在抗炎癥及促進皮膚創傷愈合方面的作用。?

發明內容：

本發明提供一種重組大鼠細胞球蛋白(Cygb)，以及所述重組大鼠細胞球蛋白在延緩皮膚衰老中的應用。?

本發明所述的重組大鼠細胞球蛋白，通過構建基因工程菌pET22b-Cygb/E.coli.BL21(DE3)，篩選高表達重組大鼠細胞球蛋白菌株，分離純化鑒定得到高純度重組大鼠細胞球蛋白。?

本發明所述的重組大鼠細胞球蛋白，具體經過以下步驟制備：?

(1)采用基因工程的方法構建高效表達重組大鼠細胞球蛋白的基因工程菌pET22b-Cygb/E.coli.BL21(DE3)；?

(2)基因工程菌經大量培養后，經離心得到菌體沉淀經反復凍融后，重懸得粗蛋白提取液，上清總蛋白分別經DEAE-Sephadex?A-50離子交換柱層析、Sephacryl?S-100凝膠過濾層析及Sephadex?G25脫鹽層析純化，得到高純度重組Cygb蛋白，通過WesternBlotting，鑒定純化后重組大鼠細胞球蛋白的準確性。?

本發明制備重組大鼠細胞球蛋白更加詳細的過程記載在實施例中。?

本發明還包括，用本發明的重組大鼠細胞球蛋白作為藥物活性成分制備的藥物組合物。?

本發明的藥物組合物，根據需要可以含有藥物可接受的載體，其中所述的重組大鼠細胞球蛋白作為藥物活性成分，其在制劑中所占重量百分比可以是0.01-99.99％，其余為藥物可接受的載體。本發明的藥物組合物，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形式是指制劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒，口服液的每瓶，顆粒劑的每袋，注射劑的每支等。?

本發明的藥物組合物可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括：滴丸劑、片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。?