[發(fā)明專利]以ICAM-1為檢測指標的胎膜早破檢測試劑盒及制備方法

有效

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• 申請日: 2010-06-02
• 公開（公告）號: CN101871942A
• 公開（公告）日: 2010-10-27
• 發(fā)明（設計）人: 胡懷忠;關祥乾;向洪發(fā);周容
• 申請（專利權）人: 成都創(chuàng)宜生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 成都科海專利事務有限責任公司 51202
• 代理人: 黃幼陵;馬新民

1.一種以ICAM-1為檢測指標的胎膜早破檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括包被有ICAM-1單克隆抗體的多孔板、生物素標記的ICAM-1單克隆抗體檢測液、與生物素標記的ICAM-1單克隆抗體結合的親和素-辣根過氧化物酶、顯色底物3′，3′，5，5′-四甲基聯苯胺和ICAM-1蛋白標準品。

2.根據權利要求1所述的以ICAM-1為檢測指標的胎膜早破檢測試劑盒，其特征在于所述多孔板每孔包被ICAM-1單克隆抗體0.9μg～1μg。

3.根據權利要求1或2所述的以ICAM-1為檢測指標的胎膜早破檢測試劑盒，其特征在于所述生物素標記的ICAM-1單克隆抗體檢測液主要由生物素標記的ICAM-1單克隆抗體、牛血清白蛋白、甘油和磷酸鹽緩沖液組成，生物素標記的ICAM-1單克隆抗體的濃度為24mg/ml，牛血清白蛋白的濃度為1.5g～3g/100ml，甘油的濃度為50ml/100ml。

4.根據權利要求3所述的以ICAM-1為檢測指標的胎膜早破檢測試劑盒，其特征在于所述生物素標記的ICAM-1單克隆抗體由生物素酰-N羥基丁二酰亞胺酯和ICAM-1單克隆抗體耦聯而成，酰-N羥基丁二酰亞胺酯與ICAM-1單克隆抗體的質量比為0.5～1∶7。

5.根據權利要求1或2所述的以ICAM-1為檢測指標的胎膜早破檢測試劑盒，其特征在于還包括樣本稀釋液，所述樣本稀釋液是在濃度0.01mol/L～0.02mol/L的磷酸鹽緩沖液或濃度0.01mol/L～0.02mol/L的三羥甲基氨基甲烷緩沖液中加入牛血清白蛋白配制而成，牛血清白蛋白的濃度為1g～2g/100ml。

6.根據權利要求3所述的以ICAM-1為檢測指標的胎膜早破檢測試劑盒，其特征在于還包括樣本稀釋液，所述樣本稀釋液是在濃度0.01mol/L～0.02mol/L的磷酸鹽緩沖液或濃度0.01mol/L～0.02mol/L的三羥甲基氨基甲烷緩沖液中加入牛血清白蛋白配制而成，牛血清白蛋白的濃度為1g～2g/100ml。

7.根據權利要求4所述的以ICAM-1為檢測指標的胎膜早破檢測試劑盒，其特征在于還包括樣本稀釋液，所述樣本稀釋液是在濃度0.01mol/L～0.02mol/L的磷酸鹽緩沖液或濃度0.01mol/L～0.02mol/L的三羥甲基氨基甲烷緩沖液中加入牛血清白蛋白配制而成，牛血清白蛋白的濃度為1g～2g/100ml。

8.一種以ICAM-1為檢測指標的胎膜早破檢測試劑盒的制備方法，其特征在于工藝步驟如下：

(1)制備包被有ICAM-1單克隆抗體的多孔板

用pH＝8～10的碳酸鹽緩沖液將ICAM-1單克隆抗體稀釋為濃度10μg/ml的稀釋液，然后將所述ICAM-1單克隆抗體稀釋液加入多孔板的各孔內，在4℃包被至少12小時；包被時間屆滿后，將濃度為1g/100ml的牛血清白蛋白溶液加入多孔板上的各孔并在37℃進行封閉反應，反應時間至少為1小時；封閉反應結束后，用pH＝7.2的磷酸鹽緩沖液洗滌多孔板，當多孔板上的未反應物被去除后即獲得包被有ICAM-1單克隆抗體的多孔板；

(2)制備生物素標記的ICAM-1單克隆抗體檢測液

①以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，生物素酰-N羥基丁二酰亞胺酯為溶質配制濃度為50μg/μl的酰-N羥基丁二酰亞胺酯溶液，以pH＝9.6的碳酸鹽緩沖液為溶劑，ICAM-1單克隆抗體為溶質配制濃度為24mg/ml的ICAM-1單克隆抗體溶液，將所述酰-N羥基丁二酰亞胺酯溶液和所述ICAM-1單克隆抗體溶液的混合液在攪拌下于室溫反應至少4小時，即獲得生物素標記的ICAM-1單克隆抗體；反應結束后，將含生物素標記的ICAM-1單克隆抗體的反應液裝入透析袋中，用pH＝9.2的磷酸鹽緩沖液在4℃進行透析，透析時間至少為12小時，其間更換透析液至少3次；繼后在透析后的所述反應液中加入牛血清白蛋白，所述牛血清白蛋白的加入量以其濃度達到3g～6g/100ml為限；

②將步驟①制備的含生物素標記的ICAM-1單克隆抗體和牛血清白蛋白的透析后反應液與甘油按體積比1∶1計量，在室溫下混合均勻即形成生物素標記的ICAM-1單克隆抗體檢測液；

(3)配備親和素-辣根過氧化物酶、顯色底物3′，3′，5，5′-四甲基聯苯胺和ICAM-1蛋白標準品。