[發(fā)明專利]甜櫻桃品種自交不親和S基因型的SSR分子標(biāo)記鑒定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010189428.7
• 申請日: 2010-05-20
• 公開（公告）號: CN101838701A
• 公開（公告）日: 2010-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 艾呈祥;余賢美;劉慶忠;苑克俊;李國田;張力思
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省果樹研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 泰安市泰昌專利事務(wù)所 37207
• 代理人: 姚德昌

一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種甜櫻桃品種(系)自交不親和S基因型的SSR分子標(biāo)記鑒定方法，尤其是一種適用于不同甜櫻桃自交不親和性(S基因型)品種(系)的鑒定、指導(dǎo)育種親本的選擇及其授粉品種的配置的SSR分子標(biāo)記鑒定方法。

二、背景技術(shù)

甜櫻桃(Prunus?avium?L.)屬配子體型自交不親和(Gametophyticself-incompatibility，GSI)，遺傳上由染色體上具有復(fù)等位基因構(gòu)成的單一位點(diǎn)或基因座控制(稱為S基因座)，一個(gè)S基因座上，植物種群內(nèi)可含有多個(gè)S等位基因(S?alleles)，稱之為S基因。甜櫻桃品種大多數(shù)為自交不親和品種，在生產(chǎn)中必須配置授粉樹或人工輔助授粉，才能獲得應(yīng)有的產(chǎn)量和果實(shí)品質(zhì)；因此使用甜櫻桃品種自交不親和S基因型的SSR分子標(biāo)記鑒定方法是十分重要。而目前在配置授粉品種時(shí)，常是依據(jù)田間不同品種間授粉坐果率的高低來確定授粉品種，這種方法雖直觀有效，但不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，盲目性比較大，而且由于人們對品種的S基因型不了解，使在選配品種時(shí)具有較大的盲目性，影響了提高櫻桃品質(zhì)。

如果知道品種的S基因型或能快速鑒定出品種的基因型，依據(jù)不同S基因型的品種間互相授粉結(jié)實(shí)，而相同S基因型的品種間授粉不結(jié)實(shí)原理，能正確選擇授粉品種，對提高櫻桃品質(zhì)具有很大的意義。

甜櫻桃品種S基因型鑒定是一項(xiàng)長期的應(yīng)用基礎(chǔ)性研究工作，隨著新品種的不斷育成和推廣，需要探索出一套簡易有效的方法來鑒定甜櫻桃品種S基因型，這不僅能為研究甜櫻桃自交不親和性機(jī)理提供更有益的試材，而且能為生產(chǎn)確定最佳授粉品種提供依據(jù)。然而，從現(xiàn)有的鑒定方法而言，主要是用田間品種間相互授粉座果率高低來確定，雖然直觀有效，但工作量大，周期長；生物技術(shù)方法雖然具有省工、快捷等優(yōu)點(diǎn)，但要求相應(yīng)的設(shè)備和技術(shù)條件，有一定的局限性，從而使甜櫻桃品種S基因型鑒定進(jìn)展緩慢。尤其在我國，櫻桃生產(chǎn)者選用授粉品種時(shí)，多按傳統(tǒng)的田間授粉率高低來確定，而對于通過鑒定品種的S基因型，選擇具有不同S基因型品種作為授粉樹科學(xué)性認(rèn)識不足，是迄今我國櫻桃新品種選育慢的主要原因之一。甜櫻桃品種S基因型鑒定是一個(gè)極其薄弱而又急待加強(qiáng)的研究領(lǐng)域。

三、發(fā)明內(nèi)容

為了克服上述技術(shù)缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的是提供一種甜櫻桃品種(系)自交不親和S基因型的SSR分子標(biāo)記鑒定方法，可提高自交不親和基因型的檢測效率，縮短了甜櫻桃育種進(jìn)程，節(jié)約了生產(chǎn)成本。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

用PTCR4SSR標(biāo)記，其SSR引物序列：

上游引物5′-CATAGGTTCAAACCATACCCGTG-3′

下游引物5′-CTCATCTTTGTAGGGTATAATACC-3′

擴(kuò)增不同甜櫻桃品種的DNA，可擴(kuò)增出255bp的擴(kuò)增片段，標(biāo)志著花粉S基因存在，通過瓊脂糖電泳檢測獲得電泳圖；

根據(jù)瓊脂糖電泳圖，確定各品種(系)的自交不親和基因型：相同譜帶為同一S基因型，反之為不同S基因型。

本發(fā)明設(shè)計(jì)了，SSR擴(kuò)增反應(yīng)體系(25μL)中含有10×PCR?buffer?2.5±0.25μL，2.5mmol·L^-1dNTPs?2.0±0.2μL，MgCl₂(2.5mmol·L^-1)2.0±0.2μL，1U?Taq?DNA聚合酶1±0.1μL，SSR上、下游引物(5pmol·μL^-1)1±0.1μL。

本發(fā)明設(shè)計(jì)了，SSR擴(kuò)增反應(yīng)體系(20μL)中含有10×PCR?buffer?2.0±0.2μL，2.5mmol·L^-1dNTPs?1.6±0.16μL，MgCl₂(2.5mmol·L^-1)1.6±0.16μL，0.8U?Taq?DNA聚合酶0.8±0.08μL，SSR上、下游引物(5pmol·μL^-1)0.8±0.08μL。

本發(fā)明設(shè)計(jì)了，SSR擴(kuò)增反應(yīng)體系(15μL)中含有10×PCR?buffer?1.5±0.15μL，2.5mmol·L^-1dNTPs?1.2±0.12μL，MgCl₂(2.5mmol·L^-1)1.2±0.12μL，0.6U?Taq?DNA聚合酶0.6±0.06μL，SSR上、下游引物(5pmol·μL^-1)0.6±0.06μL。