[發(fā)明專利]一種集成高效富集二維毛細管電泳裝置及富集分離方法

無效

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• 申請日: 2010-05-23
• 公開（公告）號: CN101893598A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張召香;杜秀珍
• 申請（專利權(quán)）人: 青島科技大學(xué)
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N1/40
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及毛細管電泳技術(shù)，具體地說是一種集成高效富集二維毛細管電泳裝置及富集分離方法。

背景技術(shù)

對復(fù)雜樣品的分離分析，一維毛細管電泳的分離能力有限。二維毛細管電泳是近年來發(fā)展起來的新的分離技術(shù)，由于其峰容量大、分辨率高，在復(fù)雜樣品的分離分析中倍受關(guān)注。然而，迄今為止，二維毛細管電泳分析復(fù)雜樣品的報道還很少，主要原因是二維毛細管電泳還沒有商品化儀器，二維毛細管柱間的接口難以制作。目前已報道的二維毛細管電泳接口有十字交叉型接口[文獻1：Michels，D.A.；Hu，S.；Dambrowitz，K.A.；Eggertson，M.J.；Lauterbach，K.；Dovichi，N.J.Electrophoresis，2004，25，3098-3105.]、微注射器接口[文獻2：Zhang，M.；El?Rassi，Z.J.Proteome?Res.，2006，5，2001-2008.]、聚砜中空纖維膜接口[文獻3：Yang，C.；Liu，H.；Yang，Q.；Zhang，L.；Zhang，W.；Zhang，Y.Anal.Chem.，2003，75，215-218.]和蝕刻多孔膜接口[文獻4：Liu，H.；Zhang，L.；Zhu，G.；Zhang，W.；Zhang，Y.Anal.Chem.，2004，76，6506-6512.]，以上報道的二維毛細管電泳裝置存在著只適用于蛋白質(zhì)等生物大分子的分離分析、在二維接口處損失部分待測物以及第一維分離區(qū)帶在接口處擴散等缺陷，將二維毛細管電泳用于低分子量物質(zhì)分離分析的裝置及方法還未見報道。

毛細管柱過細的內(nèi)徑使得其光譜檢測光程過小，對檢測靈敏度產(chǎn)生很大影響，限制了其對痕量組分的分離分析，為提高靈敏度，只好采用激光誘導(dǎo)熒光[文獻5：Zhu，C.R.；He，X.Y.；Kraly，J.R.；Jones，M.R.；Whitmore，C.D.；Gomez，D.G.；Eggertson，M.J.；Quigley，W.；Boardman，A.；Dovichi，N.J.Anal.Chem.，2007，79，765-768.]、質(zhì)譜[文獻6：Schoenherr，R.M.；Ye，M.；Vannatta，M.；Dovichi，N.J.Anal.Chem.，2007，79，2230-2238.]等高靈敏檢測器同二維毛細管電泳聯(lián)用，但同高靈敏檢測器聯(lián)用使整個二維分離檢測裝置非常復(fù)雜，且價格昂貴。在線富集技術(shù)可使檢測靈敏度得到較大提高，場放大進樣、大體積樣品堆積、瞬間等速電泳以及離子選擇性耗盡進樣等富集法可使靈敏度提高1000倍以上，而pH修飾法、動態(tài)pH連接法、膠束掃集法以及瞬間移動化學(xué)反應(yīng)界面法等富集方法只需改變緩沖溶液的組成或pH即可實現(xiàn)高效富集，非常適合于二維毛細管電泳柱間切換時通過調(diào)整二維分離緩沖液的成分及pH進行在線富集，壓縮樣品區(qū)帶，避免第一維分離區(qū)帶在柱間接口處擴散，提高檢測靈敏度。但到目前為止，將在線富集技術(shù)集成到二維毛細管電泳中提高檢測靈敏度和柱效的研究還未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

為克服上述不足，本發(fā)明的目的是提供一種柱效和靈敏度更高、適于復(fù)雜樣品中痕量組分要求的集成高效富集二維毛細管電泳裝置及富集分離方法，它具有分離柱效高、檢測靈敏度高、分離度大、二維分離模式轉(zhuǎn)換靈活的特點，不僅適用于蛋白質(zhì)等生物大分子的富集分離，還可用于低分子量物質(zhì)的富集分離分析。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

一種集成高效富集二維毛細管電泳裝置，包括：一個二維毛細管電泳接口；兩根毛細管柱分別作為第一維和第二維毛細管，第一維毛細管出口端與接口的一端相連，其進樣端置于裝有第一維分離緩沖液的入口池中，第二維毛細管的進樣端與接口的另一端相連，其出口端置于裝有第二維分離緩沖液的出口池中。

所述二維毛細管電泳接口為一套管，在套管管壁一側(cè)打一小孔，在孔中插入一側(cè)管并與開關(guān)閥相連；所述第一維和第二維毛細管柱的內(nèi)徑可以為25～75μm，長度為10～60cm。

應(yīng)用所述裝置進行集成高效富集二維分離時，樣品組分在第一維毛細管入口端預(yù)富集后進入第一維毛細管柱中分離，第一維流出組分順次流經(jīng)接口并進入第二維毛細管進行電泳分離，樣品組分流經(jīng)接口時采用富集技術(shù)避免第一維分離組分在接口處擴散，實現(xiàn)集成高效富集二維毛細管電泳分離。