[發明專利]連續補料發酵生產槐糖脂的方法

無效

• 申請號: 201010185605.4
• 申請日: 2010-05-28
• 公開（公告）號: CN101845469A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 徐勇虎;劉曉鷗;國華;李睿穎;王永樂;胡婭君;劉云
• 申請（專利權）人: 天津實發中科百奧工業生物技術有限公司
• 主分類號: C12P19/12
• 分類號: C12P19/12;C12N1/16;C12R1/88
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 劉英蘭

1.一種連續補料發酵生產槐糖酯的方法，其特征在于實施步驟如下：

（1）孢子懸液的制備：將球擬酵母菌TJZKBA10326接種到培養基斜面上，于30℃恒溫培養2-4天，加入質量濃度為0.75%的生理鹽水洗滌菌絲體，獲得菌懸液，懸液中孢子含量為10⁵-10⁶個，待用；斜面培養基組成包括，單位1L：葡萄糖8g，麥芽粉3g，蛋白胨4g，酵母粉4g,瓊脂15g，用蒸餾水定容至1L，pH值3.5；

（2）上述菌懸液用于接種至滅菌后的液體種子培養基中，液體種子培養基組成包括，單位1L：糖類含量20-60g，油類含量20-60g，酵母粉4-8g，尿素0.5-1g,用蒸餾水定容至1L，pH值3.5；將液體種子培養基于121℃、15min滅菌再冷卻至室溫；然后按照體積百分比2-5%的接種量將孢子懸液接入上述冷卻的液體種子培養基中，500ml規格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于30-34℃、轉速為100-150rpm的搖床上培養24h，得到液體種子；

（3）上述液體種子培養基用于接種至滅菌后的5L發酵罐中，發酵罐培養基組成包括，單位1L：初始糖類含量30-80g,初始油類含量30-80g,酵母粉4-8g,尿素0.5-1g；用蒸餾水定容至3L，pH值4.0-4.5，將發酵罐培養基于121℃、15min滅菌再冷卻至室溫；然后按照體積比2-5%的接種量將液體培養基接入上述冷卻的發酵罐培養基中，發酵溫度30-34℃，溶氧控制在30-40%，發酵時間24h；

（4）發酵24-72h，每12h補加濃度為30-60g/L的油類；發酵過程中，補加濃度為30-60g/L的葡萄糖，控制葡萄糖濃度在5-10g/L；溶氧20-30%，pH值3.3-3.8；

（5）發酵72h結束后，用與發酵液等體積的有機溶劑乙酸乙脂/異丙醇，所述乙酸乙脂/異丙醇兩者比例4：1，單位v/v，混合有機溶劑提取槐糖脂，并在70℃抽真空除去有機溶劑，得到槐糖脂產量為200-240g/L。

2.根據權利要求1所述的連續補料發酵生產槐糖酯的方法，其特征在于所述糖類選用葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、淀粉、菊糖其中一種。

3.根據權利要求1所述的連續補料發酵生產槐糖酯的方法，其特征在于所述油類選用玉米油、菜籽油、大豆油、橄欖油、蓖麻油、花生油其中一種。