[發明專利]測定體液中尼古丁的新型間接抑制免疫分析法

有效

• 申請號: 201010183989.6
• 申請日: 2010-05-26
• 公開（公告）號: CN101963617A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發明（設計）人: 蔡繼寶;唐萍萍;鄧宇;蘇慶德
• 申請（專利權）人: 江西中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/53;G01N1/28
• 代理公司: 南昌佳誠專利事務所 36117
• 代理人: 閔蓉;張建新

1.一種測定體液中尼古丁的新型間接抑制免疫分析法，特征在于：依次包括以下步驟：

(1)將0.2mmol-0.5mmol的印記分子尼古丁溶解在烴基取代甲酰胺中，再加入功能單體，震蕩，然后再加入交聯劑和生孔劑、引發劑，震蕩，混合均勻，通氮氣后用氮氣泵注射進入硅烷化活化的毛細管內，在水浴下聚合，聚合反應完成后，將毛細管連接到氮氣泵上，施加壓力除去未反應的溶液并使合成的聚合物壓縮到毛細管內壁上，施壓完成后用有機酸醇溶液沖洗毛細管以除去印記分子尼古丁和致孔劑；

(2)將尼古丁分子用乙基-二甲氨基丙基-碳二亞胺和N-羥基丁二酰亞胺衍生并鍵合到SPR裸金芯片上，將制備好的毛細管與生物傳感器聯用；

(3)采用磷酸鹽緩沖液稀釋Anti-NIC單克隆抗體，并加入蛋白質，采用有機酸鹽處理尼古丁樣品和標樣，調節pH；

(4)采用在線分子印記聚合物萃取-等離子體共振技術聯用測定體液中的尼古丁：首先將Anti-NIC單克隆抗體溶液通過毛細管并進入傳感器芯片檢測，響應信號為RU1，將其作為參照，然后將待測的尼古丁溶液通過毛細管柱，尼古丁分子就被管內的聚合物涂層選擇性地萃取和富集，最后再將相同濃度的Anti-NIC單克隆抗體溶液通過毛細管進入SPR芯片表面，Anti-NIC單克隆抗體首先被毛細管涂層上萃取的NIC抑制，使剩下的進入芯片表面的Anti-NIC單克隆抗體量減少，相應的響應信號也減弱，為RU2：ΔRU＝RU1-RU2。

2.根據權利要求1所述的一種測定體液中尼古丁的新型間接抑制免疫分析法，特征在于：所述步驟(4)所述體液可為尿液、血液、血漿或吐液。

3.根據權利要求1所述的一種測定體液中尼古丁的新型間接抑制免疫分析法，特征在于：所述步驟(1)中所述烴基取代甲酰胺為包括一個、二個或三個碳原子取代烷基的甲酰胺。

4.根據權利要求1所述的一種測定體液中尼古丁的新型間接抑制免疫分析法，特征在于：所述步驟(1)所述印記分子尼古丁、功能單體、交聯劑物質的量比例為1∶(2-10)∶(30-60)。

5.根據權利要求1所述的一種測定體液中尼古丁的新型間接抑制免疫分析法，特征在于：所述功能單體為包括一個、二個或三個碳原子取代烯烴基的吡啶；所述交聯劑為包括一個、二個或三個碳原子取代烷基的烯酸一元醇酯或多元醇酯；所述生孔劑為包括十一個、十二個或十三個碳原子一元醇或多元醇；引發劑為一個、二個或三個烴基的一取代或多取代偶氮睛。

6.根據權利要求1所述的一種測定體液中尼古丁的新型間接抑制免疫分析法，特征在于：步驟(1)中所述震蕩為超聲震蕩或機械震蕩；震蕩時間30min-60min；所述通氮氣時間為5-20min；水浴溫度為40℃-80℃；水浴時間為3h-6h；毛細管連接到氮氣泵上，施加壓力為：10MPa-20Mpa；時間持續5min-10min。

7.根據權利要求1所述的一種測定體液中尼古丁的新型間接抑制免疫分析法，特征在于：所述有機酸醇溶液沖洗毛細管以除去印記分子尼古丁和致孔劑中有機酸為一個、二個或三個碳原子的一元有機酸或多元有機酸；醇為一個、二個或三個碳原子的一元醇或多元醇；有機酸和醇體積比為1∶(3-6)；有機酸醇溶液的量為1mL-10mL。

8.根據權利要求1所述的一種測定體液中尼古丁的新型間接抑制免疫分析法，特征在于：步驟(3)中所述磷酸鹽緩沖溶液pH控制在5-10；蛋白質可為牛血清白蛋白；蛋白質濃度為5-20g/L；有機酸鹽為包含一個、二個或三個碳原子酸銨；調解pH為3-6。