[發明專利]一種應用于海參、蝦或鮑魚養殖的制劑

無效

• 申請號: 201010183143.2
• 申請日: 2010-05-12
• 公開（公告）號: CN102240304A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 崔云龍;李洪福;孫立國
• 申請（專利權）人: 青島東海藥業有限公司
• 主分類號: A61K35/74
• 分類號: A61K35/74;A61P37/04;A61P43/00;A23K1/18;A23K1/16;C02F3/34;C12N1/20
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技術領域

本發明涉及一種應用于海參、蝦或鮑魚養殖的制劑，具體是由酪酸梭菌制成的制劑在促進海參、蝦或鮑魚的生長，提高海參、蝦或鮑魚免疫力，防治海參、蝦或鮑魚疾病，提高飼料轉化率或凈化養殖水質中的應用。

背景技術

2006年底在全國爆發的大菱鲆藥殘事件給我們敲響了警鐘。歐盟已于2006年全面禁止抗菌藥作為飼料添加劑在養殖中的應用。為保證食品安全，美國等發達國家對肉類、海產品等抗菌藥殘留進行檢測。隨著中國加入世貿組織，名優產品出口被普遍看好。但由于國內養殖不科學使用抗生素等有害藥物的現象嚴重，大大限制了產品的出口。開發抗菌藥替代產品應用于養殖業是目前市場所需要的。

發明內容

本發明的目的是提供一種促進海參、蝦或鮑魚的生長，提高海參、蝦或鮑魚免疫力，防治海參、蝦或鮑魚疾病，提高飼料轉化率或凈化養殖水質的制劑，該制劑由酪酸梭菌制成。

本發明的制劑的制備優選是通過下述步驟實施的，但不局限于此制備工藝，公知的能實現的制備工藝均可以：采取含酪酸梭菌的樣本，然后將樣品置于滅菌厭氧瓶內，吹入氮氣同時充分混合，迅速從中取一定量樣品加入18mL滅菌的稀釋液中，吹入氮氣同時充分混勻，在無菌操作臺內，進行10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，10^-5，10^-6，10^-7梯度稀釋，取10^-5，10^-6，10^-7三個稀釋梯度，分別涂布于酪酸梭菌選擇性單菌落分離固體培養基上，置于厭氧罐內，厭氧37℃下培養48小時，選擇長勢良好的單菌落分別接種于酪酸梭菌液體擴增培養基中，置于厭氧罐內，厭氧37℃下擴增培養48小時。將所得培養液離心(12000rpm)分離出菌體后，將菌體冷凍真空干燥，調制出各菌種的干燥菌粉，然后根據《伯杰細菌鑒定手冊》、相關細菌鑒定文獻或16S?rRNA序列對比分析進行酪酸梭菌菌種鑒定和毒性試驗，將無毒性的酪酸梭菌干燥菌粉按需要比例添加輔料制成片劑、膠囊、散劑、粉劑或液體制劑等各種劑型，或制成藥品、獸藥、飼料添加劑或水質凈化劑，也可加入其他活菌或低聚果糖等低聚糖起到協同作用。

酪酸梭菌選擇性單菌落分離固體培養基優選但不局限于：純化水1L，蛋白胨40.0g，Na₂HPO₄?5.0g，K₂HPO₄?1.0g，NaCl?2.0g，MgSO₄?0.1g，葡萄糖2.0g，瓊脂25.0g，調pH?7.6，116℃滅菌20分鐘，待其冷至50℃左右，加入卵黃液50.0m?L，加入終濃度為200μg/mL的硫酸多粘菌素B，加入終濃度200g/mL的新霉素，充分混勻后，分注于平皿中。

酪酸梭菌液體擴增培養基優選但不局限于：純化水1L，胰蛋白胨10.0g，牛肉浸膏10.0g，酵母浸膏3.0g，葡萄糖5.0g，NaCl5.0g，可溶性淀粉1.0g，半胱氨酸鹽酸鹽0.5g，醋酸鈉3.0g，瓊脂0.5g，調pH?6.6-7.0，121℃，滅菌15分鐘。

為進一步具體說明本發明，發明人利用上述方法通過酪酸梭菌選擇性單菌落分離固體培養基分離鑒定出了無毒性的酪酸梭菌，本發明所述酪酸梭菌并不局限于為說明本發明所述的菌株，只要無毒性的酪酸梭菌均是本發明所述，均在本發明的保護范圍內。

本發明所述酪酸梭菌優選但不限于丁酸梭菌DH101保藏編號CGMCC3764，丁酸梭菌DH102保藏編號CGMCC3762，丁酸梭菌QA-08保藏編號CGMCC2303或酪酸梭菌DF96101保藏編號CGMCC0313.1。

本發明實施說明中優選使用的酪酸梭菌的細菌學性質：

1、為說明本發明，本發明利用上述方法分離的酪酸梭菌分別為丁酸梭菌DH101保藏編號CGMCC3764，丁酸梭菌DH102保藏編號CGMCC3762，丁酸梭菌QA-08保藏編號CGMCC2303或酪酸梭菌DF96101保藏編號CGMCC0313.1。

2、菌落形態

顯微鏡觀察：長3.0-6.0微米，寬0.6-1.2微米，直桿或梭狀菌，革蘭氏染色陽性，產芽孢，孢子次端生。

平板形態：菌落圓形，邊緣不整齊，稍凸，不透明，顏色淡黃，表面無光澤。

3、生理生化鑒定