[發明專利]麻瘋樹籽粕毒蛋白的制備方法

無效

• 申請號: 201010180764.5
• 申請日: 2010-05-24
• 公開（公告）號: CN102260337A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 姚新華;陳新華;姚陳名
• 申請（專利權）人: 丹陽市春潤生物能源有限公司
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C07K1/36;C12P21/06;A61P35/00
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 顧進

技術領域

本發明涉及蛋白分離和純化領域，具體涉及一種制備麻瘋樹籽粕毒蛋白的方法。

背景技術

腫瘤是嚴重危害人類健康的惡性疾病，我國每年死于腫瘤疾病的患者有100多萬人，目前，已成為我國城市人口死亡的首要因素。抗腫瘤藥物市場是僅次于心血管和中樞神經系統藥物市場的全球第三大藥物市場，目前發展迅速，2007年全球銷售額為400億美元，2010年預期將增至600億美元，年增長率逾10％，在中國更是以17％的速度增長，而我國抗腫瘤藥物市場的增速一直高于醫藥行業的增速，預計未來我國抗腫瘤行業復合增長率將為26％。盡管抗腫瘤藥物的市場需求大，然而，大多數化療藥屬合成化合物，靶向性和殺傷性差，篩選周期的長、耗資巨大、成功率極低、開發難度增加。同時，人們經受多次藥害之后，加深了對化學合成藥物毒副作用的認識，更加崇尚回歸自然的抗腫瘤藥物。可見，高選擇性、高效、低毒的新型抗腫瘤藥物的研發面臨歷史性的重大機遇。

生物毒素是自然進化的產物，其毒性遠較非生物毒素強。其結構和種類多樣，往往具有特異活性和高選擇性。目前，生物毒素已成為抗腫瘤重要新藥來源，如紫杉醇、長春堿等植物毒素表現出良好的抗腫瘤活性。

麻瘋樹(Jatropha?curcas?L.)也叫小桐子、膏桐，是我國南方山區民間應用的一種木本油料樹種，其種子含油量豐富，達到種子重量的52％，種仁的60％。種子油的理化特性與柴油接近，是制備生物柴油的理想原料。

據了解，“十一五”期間，我國規劃生物柴油原料林基地建設規模83.91萬公頃，原料林全部進入結實期后，將形成年產生物柴油125萬多噸的原料供應能力。目前，已有一些頗具實力的企業和國外大型能源企業，進入麻瘋樹生物柴油這一領域，在各地籌建起有相當規模的生物柴油生產企業，預計未來全國麻瘋樹種植面積至少可達3000萬畝以上，到2017年將生產出麻瘋樹粕160Mt(核仁完全脫脂后粗蛋白含量達53％～63％，其中含90％的真蛋白)。

麻瘋樹籽粕毒蛋白curcin是一種核糖體失活蛋白(RIPs)，已有研究報道，麻瘋樹籽粕毒蛋白curcin也是一種生物毒素，其占麻瘋樹籽粕總蛋白的1.5％～3％左右。把瘋樹籽粕毒蛋白curcin作為導向藥物制備免疫毒素并將它應用到腫瘤治療方面，將是麻瘋樹籽粕毒蛋白curcin研究的熱點。因此，隨著對麻瘋樹籽粕毒蛋白curcin抗腫瘤活性研究的不斷深入，麻瘋樹籽粕毒蛋白curcin將成為人類向腫瘤挑戰的有力武器之一，具有無限的發展前景。

但是，目前制備麻瘋樹籽粕毒蛋白curcin主要在實驗室的微量、耗時及費用高的提取階段，不能滿足大規模的工業化生產要求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種制備麻瘋樹籽粕毒蛋白的方法，能夠對麻瘋樹籽粕資源進行精深加工和綜合利用開發，其規模大、耗時短、成本低。

本發明提供一種制備麻瘋樹籽粕毒蛋白的方法，包括如下步驟：

(1)將曬干的麻瘋樹籽進行粉碎，獲得粉碎的麻瘋樹籽粕，其粉碎粒徑為100μm～600μm。

(2)將粉碎的麻瘋樹籽粕擠壓膨化預處理后，用正己烷進行脫脂，獲得脫脂麻瘋樹籽粕。

(3)采用復合植物水解酶對脫脂麻瘋樹籽粕進行酶解，獲得的產物采用高溫淀粉酶進行酶解，然后離心取得沉淀。

(4)按照固液質量比為1∶5～1∶30向步驟(3)所述沉淀中加入蛋白復合提取劑進行提取，除去殘渣后獲得麻瘋樹籽粕毒蛋白粗提液。

(5)麻瘋樹籽粕毒蛋白粗提液分別通過截留分子量為30kDa和濃縮膜分子量為20kDa的超濾膜，獲得分子量小于30kDa大于20kDa濃縮液，然后經脫鹽柱脫鹽、脫色后冷凍干燥得到麻瘋樹籽粕毒蛋白。

步驟(3)中所述復合植物水解酶的酶解條件為：復合植物水解酶的加入量為所述脫脂麻瘋樹籽粕質量的2％～5％，酶解溫度40℃～65℃，酶解的pH為4～6，酶解時間1h～3h。所述高溫淀粉酶酶解條件為：高溫淀粉酶的加入量為脫脂麻瘋樹籽粕質量的1％～4％，酶解溫度80℃～95℃，酶解的pH為5.5～7.5，酶解時間1h～3h。最好是，所述植物復合水解酶與高溫淀粉酶的總質量為脫脂麻瘋樹籽粕質量的2.5％，所述植物復合水解酶與高溫淀粉酶質量比2∶1；植物復合水解酶酶解時間2h，酶解溫度為50℃，酶解pH為4.5；高溫淀粉酶酶解時間1h，酶解溫度為90℃，pH為7.0。