[發明專利]一種用于止血的人凝血因子VII及其制備方法

無效

• 申請號: 201010179254.6
• 申請日: 2010-05-21
• 公開（公告）號: CN102250236A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 孟德勝;盧來春;胡大強;傅若秋;溫悅;吳畏
• 申請（專利權）人: 孟德勝;盧來春;胡大強
• 主分類號: C07K14/745
• 分類號: C07K14/745;C07K1/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于一種新的多肽類化合物，具體涉及用于止血的人凝血因子VII及其制備方法，可用于創傷出血后的止血。

背景技術

出血是戰時和平時最常見的緊急情況之一，在戰傷救治中是否能有效止血對挽救傷員生命起著至關重要的作用。目前臨床上常用的立芷雪(巴西矛頭蝮蛇血凝酶)由于其療效明確，在臨床廣泛使用，但由于該藥為國外進口，我國無自主知識產權，因此出于國家戰略安全考慮不可能將其作為軍隊特需藥品使用。因此研發具有自主知識產權的止血藥列裝部隊對減少戰時由于失血引起的傷亡具有重要作用。

我國現行裝配的急救包中的止血材料的功能仍屬傳統壓迫包扎止血，這些止血材料雖對一線傷員的緊急救治起了積極的作用，但科技含量不高，功效低，遠不能滿足現代高技術局部戰爭條件下戰傷急救，特別是一線救治的需要。目前臨床常用的止血材料如紗布、纖維、繃帶等止血時間長，易與傷口粘連而不易換藥，對傷口的感染和化膿等無能為力；而一些可降解的止血材料，如明膠海綿、纖維蛋白膠及膠原海綿等，也存在著與組織黏附力較差，對有凝血功能障礙的止血望洋興嘆，且還有可能導致病毒感染的弱點；雖通過載入一些高效止血劑如：凝血酶、抑肽酶等(Tachocomb^R)可明顯改善其止血性能，但除增加了生產成本外，還需要苛刻的儲存條件，或者繁瑣的操作過程(即用即配)。因此，高效止血劑的研制一直是各國醫藥工作者關注的焦點，一些經濟大國更是每年耗資數億用于該類產品的研發。

在各類止血劑中，多孔止血劑以其特有的理化性能引起人們的關注。這類止血劑的止血功能和它們的多孔結構有關，當其作用于創口時，能夠利用液體特有的毛細現象，迅速吸取傷口血液中的水分，從而使血液中的凝血物質迅速聚集，凝結在傷口表面，堵塞住破裂的血管，達到止血的目的。這類止血劑主要有無機沸石類和天然可降解生物材料兩大類。2002年獲得美國FDA批準的由美國Z-Medica公司生產的QuikClot就是一種由多孔沸石復合材料組成的粉術狀止血劑，在伊拉克戰爭中已裝備給美軍士兵。最近公開的美國專利US6060461也描述了一種具有微孔結構的顆粒材料，它的止血效果非常顯著。但這類無機多孔止血劑在吸收血液中的水分后會放出大量的熱，最高溫度能達到100℃左右，對實驗動物創面周圍皮膚，肌肉，神經，血管和脂肪組織造成明顯熱損傷。因此未來的趨勢是研制生物相容性、組織吸附性和吸濕性好的高效止血藥物。

發明內容

本發明旨在提供一種從人類血液中提出分離得到的多肽類化合物，可用于創傷出血后的止血。其分離純化方法步驟為：

1、新鮮人血漿用冷凍1周以上

2、取冷凍人血漿，加入氯化鋇溶液，混合后，離心。沉淀用緩沖液清洗，將沉淀加入到硫酸銨中進行混懸，混合，離心，收集上清液，得凝血因子粗提物

3、分離出的粗提物用鹽緩沖液透析以除去硫酸銨。

4、分離得到的凝血因子粗提物加到抗凝血因子VII親和層析柱上，用緩沖液洗脫，得到凝血因子VII。

本發明具有以下特點

1.采用抗凝血因子VII親和層析柱從人血漿中提純分離得到了凝血因子VII。

具體實施方式

實施例1??分離純化方法示例1

1、新鮮人血漿用枸櫞酸鈉抗凝后于-20℃冷凍1周以上，自然解凍，綢布過濾去除絮狀物，得濾液，備用。

2、取冷凍人血漿，加入1mol/L?BaCl2溶液，混合1h后，5000轉/分離心15min。沉淀用0.05M磷酸鹽緩沖液(pH7.00)清洗3次，將沉淀加入到40％(NH4)2S04中進行混懸，在2～4℃混合18h后，5000轉/分離心10min，收集上清液，得凝血因子粗提物；分離出的粗提物用0.9％NaCl和10mM磷酸鹽緩沖液(pH?7.00)透析18h以除去(NH4)2S04。

3、分離得到的凝血因子粗提物加到抗凝血因子VII親和層析柱上，未被吸附的蛋白用于后續分離。層析柱用平衡緩沖液充分沖洗，然后用0.5M?NaCl和10mM磷酸鹽緩沖液(pH7.00)洗脫，直至洗脫液在280nm的吸收度＜0.1。最后用2M鹽酸胍(pH7.00)洗脫解吸附得到凝血因子VII。