[發明專利]梅毒特異性IgG抗體與特異性總抗體聯合檢測試劑條及其制備方法

有效

• 申請號: 201010179111.5
• 申請日: 2010-05-19
• 公開（公告）號: CN101825635A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發明（設計）人: 楊天賜;張忠英;林麗蓉;張長弓
• 申請（專利權）人: 廈門大學附屬中山醫院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/571;G01N33/543
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

1.梅毒特異性IgG抗體與特異性總抗體聯合檢測試劑條，其特征在于設有第1試劑條和第2試劑條；

第1試劑條設有第1載體板、第1加樣墊、第1膠體金墊、第1硝酸纖維膜、梅毒特異性IgG抗體檢測線、第1對照線和第1吸收墊；第1加樣墊、第1膠體金墊、第1硝酸纖維膜和第1吸收墊依次粘貼在第1載體板上表面，第1加樣墊的一端設在第1膠體金墊的一端上，第1膠體金墊的另一端設在第1硝酸纖維膜的一端上，第1吸收墊的一端設在第1硝酸纖維膜的另一端上，梅毒特異性IgG抗體檢測線和第1對照線依次設在第1硝酸纖維膜上；在梅毒特異性IgG抗體檢測線處包被抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體，在第1對照線處包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體；

第2試劑條設有第2載體板、第2加樣墊、第2膠體金墊、第2硝酸纖維膜、特異性總抗體檢測線、第2對照線和第2吸收墊；第2加樣墊、第2膠體金墊、第2硝酸纖維膜和第2吸收墊依次粘貼在第2載體板上表面，第2加樣墊的一端設在第2膠體金墊的一端上，第2膠體金墊的另一端設在第2硝酸纖維膜的一端上，第2吸收墊的一端設在第2硝酸纖維膜的另一端上，特異性總抗體檢測線和第2對照線依次設在第2硝酸纖維膜上；在特異性總抗體檢測線處包被抗人Ig單克隆抗體或梅毒特異性抗原TPN17和/或梅毒特異性抗原TPN47，在第2對照線處包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體。

2.如權利要求1所述的梅毒特異性IgG抗體與特異性總抗體聯合檢測試劑條，其特征在于第1試劑條的第1加樣墊與第2試劑條的第2加樣墊之間用連接膜連接。

3.如權利要求1所述的梅毒特異性IgG抗體與特異性總抗體聯合檢測試劑條的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)制備梅毒重組抗原TPN17、TPN47

采用基因克隆技術，PCR擴增編碼梅毒螺旋體抗原的DNA，并插入大腸桿菌中使其表達，得梅毒重組抗原TPN17和TPN47；

2)硝酸纖維素膜的點樣

在梅毒特異性IgG抗體檢測線上包被抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體，在特異性總抗體檢測線處包被抗人Ig單克隆抗體或梅毒特異性抗原TPN17和/或梅毒特異性抗原TPN47，晾干；

3)制備膠體金

采用檸檬酸三鈉還原方法制備25nm膠體金，取1％氯金酸1mL加入到100mL去離子雙蒸水中，得到的氯金酸濃度為0.01％，置于帶冷凝裝置的燒瓶中加熱至沸騰，磁力加熱攪拌下加入1％檸檬酸三鈉水溶液2.0mL，繼續加熱直至溶液呈葡萄酒色為止，冷卻后置于棕色瓶中4℃冰箱保存備用；

4)膠體金與TPN17、TPN47的標記

膠體金與梅毒特異性抗原TPN17的標記：取膠體金10m?L，用0.1mol/L?NaOH調至pH5.4，加100μg?TPN17，混勻，放置5min，加入5％BSA?1m?L混勻，4℃、10000r/min離心1h，棄上清，將沉淀用TBS緩沖液溶解至10m?L，4℃、10000r/min離心1h，棄上清，沉淀用TBS稀釋至1mL，得膠體金標記的TPN17抗原；

膠體金與梅毒特異性抗原TPN47的標記同上操作，得膠體金標記的TPN47抗原；

將膠體金標記的TPN17抗原和膠體金標記的TPN47抗原混合后，涂于玻璃纖維膜上，烘干，制備成膠體金墊；

5)制備免疫層析檢測條

將第1加樣墊、第1膠體金墊、第1硝酸纖維膜和第1吸收墊依次粘貼在第1載體板上表面，第1加樣墊的一端設在第1膠體金墊的一端上，第1膠體金墊的另一端設在第1硝酸纖維膜的一端上，第1吸收墊的一端設在第1硝酸纖維膜的另一端上，梅毒特異性IgG抗體檢測線和第1對照線依次設在第1硝酸纖維膜上；在梅毒特異性IgG抗體檢測線處包被抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體，在第1對照線處包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體，用切條機切成條狀，得梅毒特異性IgG抗體與特異性總抗體聯合檢測試劑條的第1試劑條；

將第2加樣墊、第2膠體金墊、第2硝酸纖維膜和第2吸收墊依次粘貼在第2載體板上表面，第2加樣墊的一端設在第2膠體金墊的一端上，第2膠體金墊的另一端設在第2硝酸纖維膜的一端上，第2吸收墊的一端設在第2硝酸纖維膜的另一端上，特異性總抗體檢測線和第2對照線依次設在第2硝酸纖維膜上；在特異性總抗體檢測線處包被抗人Ig單克隆抗體或梅毒特異性抗原TPN17和/或梅毒特異性抗原TPN47，在第2對照線處包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體，用切條機切成條狀，得梅毒特異性IgG抗體與特異性總抗體聯合檢測試劑條的第2試劑條。