[發明專利]一種人胰腺癌細胞系及其應用

有效

• 申請號: 201010178581.X
• 申請日: 2010-05-18
• 公開（公告）號: CN102250840B
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 聞丹憶;秦宵然;胡剛;歐陽可棟;朱明華;謝付波
• 申請（專利權）人: 上海睿智化學研究有限公司;上海長海醫院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;A01K67/027;A61K49/00;C12R1/91
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 薛琦;鐘華

技術領域

本發明屬于細胞系領域，特別涉及一種人胰腺癌細胞系及其應用。?

背景技術

胰腺癌是一種惡性程度很高的疾病，盡管相對發病率較低，一般為9～10/100000，但在西方國家中仍是腫瘤相關死亡率最高的疾?。辉谖覈l病率也呈逐年上升趨勢。胰腺癌不易在早期發現，目前尚未發現特異的臨床表現和腫瘤標志物，影像學特征亦不典型；而且由于胰腺解剖學和生物學特征，易侵犯周圍臟器和發生轉移，大多數患者在確診時，已經是疾病晚期，并轉移至肝、肺、脊柱、腎或腎上腺等器官，只能行探查或姑息性手術，但遠期效果不理想，患者大多死于肝轉移和局部復發；能進行手術切除根治者僅占5％～30％；術后復發轉移早、發生率高，單一放療或化療的治療效果不理想，預后極差。我國的外科統計資料顯示，5年生存率僅在5％左右。?

有關胰腺癌的發生、發展、轉移和耐藥的生物學機制目前尚不十分清楚。目前缺少用于胰腺癌發生機理及抗胰腺癌藥物開發的接近臨床腫瘤生物學特性的實驗材料。而運用臨床腫瘤組織直接建立細胞系的成功率較低，因此，通過運用臨床腫瘤標本先建立動物模型，進而通過原代培養建立的人源腫瘤細胞更接近于腫瘤的臨床生物學特性，對藥物的耐藥性及敏感性將具有更好的預測性。?

發明內容

本發明要解決的技術問題就是針對現有的人胰腺癌細胞系存在的生物多樣性低，與臨床上胰腺癌的生物學性狀相差較大的不足，提供一種新的人胰腺癌細胞系及其用途。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案是：一種人胰腺癌細胞，其保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：C201007。?

本發明還提供如上所述的人胰腺癌細胞的子代細胞。?

本發明還提供如上所述的人胰腺癌細胞的用途，用于在哺乳動物中產生胰腺癌。所述的哺乳動物可以是各種哺乳動物，優選裸小鼠。所述的裸小鼠優選BALC/c裸小鼠。所述的胰腺癌優選胰低分化或中分化腺癌。?

本發明還提供一種上述人胰腺癌細胞系的建立方法，包括以下步驟，?

1)獲得新鮮的臨床胰腺癌手術切除標本，切成20～50mg的小塊，皮下穿刺接種哺乳動物；?

2)穿刺接種70～90天后，將荷瘤動物處死，取出腫瘤組織，進行癌細胞的原代培養和傳代培養。?

其中，所述的哺乳動物、所述的胰腺癌都如上所述。?

所述的新鮮的臨床胰腺癌手術切除標本較佳的用哺乳動物細胞培養液或生理鹽水漂洗后再進行接種。較佳的用新鮮的HBSS緩沖液(含500U/ml青霉素G、500μg/ml硫酸鏈霉素和1.25μg/ml兩性霉素B)漂洗。?

所述的接種的方式可以是皮下穿刺接種，原位接種或者腎囊膜內接種。對于胰腺癌較佳的是進行皮下穿刺接種。?

所述的原代培養方法可以是常規的哺乳動物細胞的原代培養方法。較佳的包括以下步驟：將腫瘤組織剪切成小塊，置入培養瓶中，于37℃孵箱5％CO2條件下培養；次日，將培養瓶慢慢翻轉平放，向瓶內加入DMEM/F12培養液(含5％胎牛血清，10μg/ml重組人胰島素，6.7ng/ml亞硒酸鈉，5.5μg/ml轉鐵蛋白，2μg/ml乙醇胺，100U/ml青霉素G、100μg/ml硫酸鏈霉素和0.25μg/ml兩性霉素B)，靜置培養；?

所述的傳代培養方法可以是常規哺乳動物細胞的傳代培養方法。較佳的包括以下步驟：吸棄舊培養液，向瓶中加入新鮮的0.05％胰蛋白酶溶液，待細胞脫落后，加入新鮮的DMEM/F12培養液，仔細吹打，使之脫離瓶壁形成細胞懸液；少量在瓶壁上變圓但沒有脫落的細胞，用無菌細胞刮刀輕輕掛擦培養瓶表面，收集全部細胞，離心，分別接種于新的培養瓶；當細胞傳代到第五代以后，將培養液更換為RPMI?1640培養液(含10％胎牛血清，10μg/ml重組人胰島素，100U/ml青霉素G、100μg/ml硫酸鏈霉素和0.25μg/ml兩性霉素B)。?

本發明還提供一種篩選治療胰腺癌的候選藥物的方法，包括以下步驟：將測試化合物施用于動物模型，施用后導致胰腺癌癥狀改善或治愈的測試化合物就是治療胰腺癌的候選化合物，其中所述的動物模型具有如上所述的人胰腺癌細胞所導致的胰腺癌腫瘤。?

具體的，本發明的篩選治療胰腺癌的候選藥物的方法包括以下步驟：?

(1)將所述的胰腺癌細胞或其子代細胞制備成細胞懸液，接種于哺乳動物皮下，進行飼養，獲得人胰腺癌動物模型；?

(2)將測試化合物施用于動物模型，施用后導致胰腺癌癥狀改善或治愈的測試化合物就是治療胰腺癌的候選化合物。?