[發(fā)明專(zhuān)利]一種II型膠原關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)液及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010178173.4
• 申請(qǐng)日: 2010-05-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101810855A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 佟剛;雷靜;黃冬晶;陳淡嫦
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 佟剛
• 主分類(lèi)號(hào): A61K38/39
• 分類(lèi)號(hào): A61K38/39;A61K47/36;A61K47/26;A61P19/04
• 代理公司: 廣州三環(huán)專(zhuān)利代理有限公司 44202
• 代理人: 劉孟斌

1.一種II型膠原關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)液的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

1)對(duì)哺乳動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行預(yù)處理：包括表面活性劑處理、氧化劑處理和消毒環(huán)節(jié)；

2)提取活性II型膠原原液：將所述步驟(1)得到的軟骨經(jīng)酸溶酶解、鹽析、透析純化的方式提取活性II型膠原原液；

3)將所述步驟(2)得到的原液與輔料、等滲溶液混合后，灌裝于無(wú)菌無(wú)熱源的一次性推注器中，得到一次性注射用II型膠原關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)液；

所述表面活性劑處理為采用體積百分?jǐn)?shù)為0.1～5％的洗必泰處理10-60min；

所述氧化劑處理為采用體積百分?jǐn)?shù)為0.1～3％的過(guò)氧乙酸處理5～20min；

所述消毒采用Co⁶⁰輻照消毒，劑量為3～10kGy；

所述酸溶酶解采用摩爾濃度為0.5～1M的醋酸溶解胃蛋白酶，使所述胃蛋白酶的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)終濃度為1～2％后，將所述軟骨在4℃下酶解12～48h；

所述鹽析和透析步驟為：酸性鹽析：在pH2.5～3.0下，用0.7MNaCl進(jìn)行鹽析，10000rpm離心20min，沉淀稱(chēng)重，用6～10倍體積的0.5M?HAc溶解；中性鹽析，將上述膠原液裝在透析袋中，對(duì)0.2M?NaCl+0.05M?Tris?pH7.5溶液透析，加入固體NaCl至終濃度4.0M，靜置過(guò)夜，離心取沉淀,沉淀用0.5MHAc溶解后，對(duì)0.01MNa₂HPO₄充分透析后，離心，沉淀用0.5MHAc溶解，將上述的膠原液對(duì)0.2MNaCl+0.05MTris?pH7.5透析，過(guò)DEAE-52柱，收集流出的膠原液，監(jiān)測(cè)OD217nm吸光值。

2.如權(quán)利要求1所述的II型膠原關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)液的制備方法，其特征在于，所述輔料為硫酸軟骨素或其鈉、鉀、鈣、鋅鹽，透明質(zhì)酸或其鈉、鉀、鈣鹽，海藻酸或其鈉鹽、氨基葡萄糖或硫酸化氨基葡萄糖或鹽酸化氨基葡萄糖中的一種或多種。

3.如權(quán)利要求1所述的II型膠原關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)液的制備方法，其特征在于，所述等滲液為pH7.2～7.4的磷酸鹽緩沖液。

4.如權(quán)利要求1所述的II型膠原關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)液的制備方法，其特征在于，所述注射用II型膠原關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)液的組分為：100ml關(guān)節(jié)修復(fù)液中II型膠原含?量為1～500mg，其余為輔料和等滲溶液。

5.如權(quán)利要求4所述的II型膠原關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)液的制備方法，其特征在于，所述輔料含量為1～300mg。

6.一種按權(quán)利要求1-5之一所述的制備方法得到的II型膠原關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)液。?