[發(fā)明專利]微波促進(jìn)固相合成苦瓜MC-JJ0105多肽類似物及其應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010177978.7
• 申請(qǐng)日: 2010-05-20
• 公開（公告）號(hào): CN101824076A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃文龍;金晶;錢海;張惠斌;王敬杰;陳巍;杜闊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;C07K1/20;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04;A61K38/08;A61P3/10
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及MC-JJ0105多肽類似物及其微波促進(jìn)固相合成方法。

背景技術(shù)

糖尿病是當(dāng)今危害人類健康的重要疾病，目前全世界約有5％-7％的人受糖尿病困擾，被認(rèn)為是繼心腦血管疾病、惡性腫瘤之后，導(dǎo)致人類傷殘、死亡的第三大殺手。

糖尿病分為I型和II型，I型糖尿病是一種自身免疫疾病，患者的存活需要注射胰島素。II型糖尿病占眾多糖尿病患者總數(shù)的95％左右。II型糖尿病的原因是胰島細(xì)胞代謝發(fā)生障礙，胰島素分泌不足，或者產(chǎn)生胰島素抵抗，是以胰島素抵抗為主伴胰島素分泌相對(duì)不足，或者以胰島素分泌相對(duì)不足為主伴胰島素抵抗導(dǎo)致的代謝性疾病。胰島素分泌不足，或者產(chǎn)生胰島素抵抗都可造成血液中葡萄糖過量，當(dāng)血糖含量超過腎閾時(shí)，葡萄糖就轉(zhuǎn)移到尿中排出，從而產(chǎn)生葡萄糖尿。

苦瓜(Momordica?charantia)是一種人類有長(zhǎng)期安全食用歷史的蔬菜。近二十年來，人們?cè)诳喙系墓麑?shí)中發(fā)現(xiàn)了許多具有降血糖活性的成分，其中的多肽成分逐漸得到人們的認(rèn)識(shí)并得到一些運(yùn)用，但是由于苦瓜多肽的提取分離過于復(fù)雜，成本較高又難于得到純的多肽，現(xiàn)在我們運(yùn)用現(xiàn)代多肽合成技術(shù)能夠解決這一問題。

多肽可以通過基因工程的方法或者化學(xué)合成的方法得到?；蚬こ痰姆椒ㄔ讷@取長(zhǎng)肽(氨基酸殘基長(zhǎng)度大于50)或蛋白質(zhì)上比化學(xué)方法有優(yōu)勢(shì)，但是多肽的化學(xué)合成方法尤其是在固相合成策略出現(xiàn)后，在制備氨基酸殘基長(zhǎng)度小于40的多肽或小肽上有基因工程方法難以比擬的靈活性、多樣性和高效性等。1963年Merrifield創(chuàng)立并開發(fā)了固相合成多肽的方法。固相多肽合成一般有兩種策略：即Boc/Bzl正交保護(hù)固相合成策略和Fmoc/tBu正交保護(hù)固相合成策略，Merrifield創(chuàng)立的固相合成法即為Boc/Bzl正交保護(hù)固相合成策略。但是，Boc/Bzl正交保護(hù)固相合成策略中存在一些缺點(diǎn)，如副反應(yīng)多、條件苛刻以及在延長(zhǎng)肽鏈的過程中多肽鏈會(huì)從固相上丟失等。而隨后出現(xiàn)的Fmoc/tBu正交保護(hù)固相合成策略則反應(yīng)條件溫和的多。當(dāng)近年來微波技術(shù)運(yùn)用于多肽的固相合成中后，使多肽的合成技術(shù)產(chǎn)生了一個(gè)飛躍。微波促進(jìn)化學(xué)反應(yīng)是由于其使極性分子在微波場(chǎng)中快速旋轉(zhuǎn)，使得一些反應(yīng)速率較常規(guī)加熱方法快10到1000倍，而且產(chǎn)率大大提高。1986年Gedye等人首次報(bào)道了將微波應(yīng)用于有機(jī)合成中，微波可以促進(jìn)許多化學(xué)反應(yīng)，如Diels-Alder反應(yīng)，皂化反應(yīng)等，可以顯著地加快反應(yīng)速率并提高收率。在1992年，Hui-ming?Yu等首先報(bào)道了將微波應(yīng)用于多肽固相合成領(lǐng)域中，他們完成了?；d體蛋白片斷十肽(acyl?carrier?protein，ACP?65～74)的合成。

如何高效的合成長(zhǎng)肽(大于30肽)在世界上仍然是一個(gè)挑戰(zhàn)，因?yàn)槎嚯碾S著肽鏈的增加，其合成難度成倍增加。用傳統(tǒng)的固相方法合成長(zhǎng)肽，其收率往往很低雜質(zhì)較多純化困難，從而從實(shí)用的角度上說失去了合成的意義。其次合成周期長(zhǎng)，在中間不出現(xiàn)困難肽序的情況下30肽一般需要近一個(gè)星期時(shí)間才能完成合成周期，如果出現(xiàn)困難肽序，往往就無法合成得到目標(biāo)多肽。而使用微波促進(jìn)固相合成多肽，可以克服困難肽序，合成傳統(tǒng)固相方法無法得到的多肽，而且合成時(shí)間大大縮短，且顯著提高多肽粗品純度及收率，使得產(chǎn)品的純化大大方便，只要經(jīng)過一次制備型HPLC就能得到純度較高的產(chǎn)品；此外還可以非常方便的用D型氨基酸及非天然氨基酸等對(duì)多肽進(jìn)行定點(diǎn)修飾，去尋找活性更高、生物半衰期更長(zhǎng)的多肽，這更是基因工程技術(shù)無法做到的。因此，我們?cè)诳喙辖笛荕C-JJ0105多肽類似物的合成中采用此種方法快速高效的合成得到MC-JJ0105系列類似物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明有兩個(gè)目的第一個(gè)母的是從具降血糖活性的藥食同源植物苦瓜中得到多肽進(jìn)行修飾得到降血糖活性更高的MC-JJ0105多肽類似物。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供了MC-JJ0105衍生物的固相制備方法，本發(fā)明采用微波促進(jìn)Fmoc/tBu正交保護(hù)固相合成策略高效快速地合成得到系列MC-JJ0105類似物。

其特征在于：采用微波促進(jìn)Fmoc/tBu正交保護(hù)固相合成策略，于固相載體上先合成得到載有第一個(gè)Fmoc保護(hù)氨基酸的樹脂，茚三酮法檢測(cè)為陰性后脫去Fmoc保護(hù)基得到載有第一個(gè)氨基酸殘基的樹脂；再進(jìn)入下一個(gè)偶聯(lián)循環(huán)，按照相應(yīng)的肽序用不同的保護(hù)氨基酸重復(fù)偶聯(lián)和脫保護(hù)的步驟，依次延長(zhǎng)所需的氨基酸序列，合成得到載有相應(yīng)多肽的樹脂，最后用裂解劑將多肽從樹脂上切割下來得到多肽粗品。粗品經(jīng)制備級(jí)高效液相色譜純化，凍干得多肽純品。