[發明專利]微波促進固相合成苦瓜MC-JJ0105多肽類似物及其應用

無效

• 申請號: 201010177978.7
• 申請日: 2010-05-20
• 公開（公告）號: CN101824076A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發明（設計）人: 黃文龍;金晶;錢海;張惠斌;王敬杰;陳巍;杜闊
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/20;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04;A61K38/08;A61P3/10
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技術領域

本發明涉及MC-JJ0105多肽類似物及其微波促進固相合成方法。

背景技術

糖尿病是當今危害人類健康的重要疾病，目前全世界約有5％-7％的人受糖尿病困擾，被認為是繼心腦血管疾病、惡性腫瘤之后，導致人類傷殘、死亡的第三大殺手。

糖尿病分為I型和II型，I型糖尿病是一種自身免疫疾病，患者的存活需要注射胰島素。II型糖尿病占眾多糖尿病患者總數的95％左右。II型糖尿病的原因是胰島細胞代謝發生障礙，胰島素分泌不足，或者產生胰島素抵抗，是以胰島素抵抗為主伴胰島素分泌相對不足，或者以胰島素分泌相對不足為主伴胰島素抵抗導致的代謝性疾病。胰島素分泌不足，或者產生胰島素抵抗都可造成血液中葡萄糖過量，當血糖含量超過腎閾時，葡萄糖就轉移到尿中排出，從而產生葡萄糖尿。

苦瓜(Momordica?charantia)是一種人類有長期安全食用歷史的蔬菜。近二十年來，人們在苦瓜的果實中發現了許多具有降血糖活性的成分，其中的多肽成分逐漸得到人們的認識并得到一些運用，但是由于苦瓜多肽的提取分離過于復雜，成本較高又難于得到純的多肽，現在我們運用現代多肽合成技術能夠解決這一問題。

多肽可以通過基因工程的方法或者化學合成的方法得到。基因工程的方法在獲取長肽(氨基酸殘基長度大于50)或蛋白質上比化學方法有優勢，但是多肽的化學合成方法尤其是在固相合成策略出現后，在制備氨基酸殘基長度小于40的多肽或小肽上有基因工程方法難以比擬的靈活性、多樣性和高效性等。1963年Merrifield創立并開發了固相合成多肽的方法。固相多肽合成一般有兩種策略：即Boc/Bzl正交保護固相合成策略和Fmoc/tBu正交保護固相合成策略，Merrifield創立的固相合成法即為Boc/Bzl正交保護固相合成策略。但是，Boc/Bzl正交保護固相合成策略中存在一些缺點，如副反應多、條件苛刻以及在延長肽鏈的過程中多肽鏈會從固相上丟失等。而隨后出現的Fmoc/tBu正交保護固相合成策略則反應條件溫和的多。當近年來微波技術運用于多肽的固相合成中后，使多肽的合成技術產生了一個飛躍。微波促進化學反應是由于其使極性分子在微波場中快速旋轉，使得一些反應速率較常規加熱方法快10到1000倍，而且產率大大提高。1986年Gedye等人首次報道了將微波應用于有機合成中，微波可以促進許多化學反應，如Diels-Alder反應，皂化反應等，可以顯著地加快反應速率并提高收率。在1992年，Hui-ming?Yu等首先報道了將微波應用于多肽固相合成領域中，他們完成了酰基載體蛋白片斷十肽(acyl?carrier?protein，ACP?65～74)的合成。

如何高效的合成長肽(大于30肽)在世界上仍然是一個挑戰，因為多肽隨著肽鏈的增加，其合成難度成倍增加。用傳統的固相方法合成長肽，其收率往往很低雜質較多純化困難，從而從實用的角度上說失去了合成的意義。其次合成周期長，在中間不出現困難肽序的情況下30肽一般需要近一個星期時間才能完成合成周期，如果出現困難肽序，往往就無法合成得到目標多肽。而使用微波促進固相合成多肽，可以克服困難肽序，合成傳統固相方法無法得到的多肽，而且合成時間大大縮短，且顯著提高多肽粗品純度及收率，使得產品的純化大大方便，只要經過一次制備型HPLC就能得到純度較高的產品；此外還可以非常方便的用D型氨基酸及非天然氨基酸等對多肽進行定點修飾，去尋找活性更高、生物半衰期更長的多肽，這更是基因工程技術無法做到的。因此，我們在苦瓜降血糖MC-JJ0105多肽類似物的合成中采用此種方法快速高效的合成得到MC-JJ0105系列類似物。

發明內容

本發明有兩個目的第一個母的是從具降血糖活性的藥食同源植物苦瓜中得到多肽進行修飾得到降血糖活性更高的MC-JJ0105多肽類似物。

本發明的第二個目的是提供了MC-JJ0105衍生物的固相制備方法，本發明采用微波促進Fmoc/tBu正交保護固相合成策略高效快速地合成得到系列MC-JJ0105類似物。

其特征在于：采用微波促進Fmoc/tBu正交保護固相合成策略，于固相載體上先合成得到載有第一個Fmoc保護氨基酸的樹脂，茚三酮法檢測為陰性后脫去Fmoc保護基得到載有第一個氨基酸殘基的樹脂；再進入下一個偶聯循環，按照相應的肽序用不同的保護氨基酸重復偶聯和脫保護的步驟，依次延長所需的氨基酸序列，合成得到載有相應多肽的樹脂，最后用裂解劑將多肽從樹脂上切割下來得到多肽粗品。粗品經制備級高效液相色譜純化，凍干得多肽純品。