[發明專利]一種特異性重組腺病毒及制備與應用

有效

• 申請號: 201010177682.5
• 申請日: 2010-05-07
• 公開（公告）號: CN101864400A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 王志平
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/66;C12N15/63;A61K48/00;A61P35/00;A61P13/10;C12R1/93
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102
• 代理人: 張晉

1.一種特異性重組腺病毒的制備方法，其特征是將前列腺干細胞抗原增強子PSCAE和人尿路特異性蛋白UPII啟動子插入到雄激素受體AR與腺病毒基因E1A的融合基因上游，構成具有膀胱癌特異性的重組腺病毒。

2.權利要求1所述的一種特異性重組腺病毒的制備方法，其特征是分別用具有膀胱癌特異性的啟動子和增強子取代控制該重組病毒復制所必需的早期基因E1A表達的啟動子和增強子，并且引入了一種雄激素受體基因使其同E1A基因融合表達，處于上游同一個膀胱特異性啟動子的控制之下。

3.權利要求2所述的一種特異性重組腺病毒的制備方法，其特征是將起始穿梭載體P-Shuttle?CMV內在的BamHI位點切除，再在該切除位點處重新引入含有AgeI，NheI，BamHI和NotI位點的多克隆位點，將E1A與AR用BamHI和EcoRV雙酶切，保留酶切后得到的E1A-AR融合片段，將膀胱組織特異性UPII啟動子插入到穿梭載體質粒的NheI和BamHI位點，將前列腺干細胞抗原增強子PSCAE插入到穿梭載體相應的AgeI和NheI位點，構建得到質粒Rp-PSCAE-UPII-E1A；將5’末端磷酸化后的AR編碼序列與Rp-PSCAE-UPII-E1A質粒載體的連接，得到載體Rp-E-UPII-E1A-AR；再將Rp-PSCAE-UPll-E1A-AR與pAdEasy質粒在大腸桿菌中進行同源重組，重組產物在人胚腎293細胞中進行包裝得到特異性重組腺病毒Ad-PSCAE-UPII-E1A-AR。

4.權利要求3所述的方法制備的特異性重組腺病毒，其特征是其保藏編號為：CCTCC-V201001。

5.權利要求1或2或3的方法制備的特異性重組腺病毒在制備治療膀胱腫瘤藥物中的應用。

6.權利要求4所述的特異性重組腺病毒在制備治療膀胱腫瘤藥物中的應用。

7.重組質粒載體Rp-PSCAE-UPll-E1A-AR的制備方法，其特征是將起始穿梭載體P-Shuttle?CMV內在的BamHI位點切除，在該切除位點處重新引入含有AgeI，NheI，BamHI和NotI位點的多克隆位點，再將E1A與AR用BamHI和EcoRV雙酶切，保留酶切后得到的E1A-AR融合片段，將膀胱組織特異性UPII啟動子插入到穿梭載體質粒的NheI和BamHI位點，將前列腺干細胞抗原增強子PSCAE插入到穿梭載體相應的AgeI和NheI位點，構建得到質粒Rp-PSCAE-UPII-E1A；將5’末端磷酸化后的AR編碼序列與Rp-PSCAE-UPII-E1A質粒載體的連接，得到載體Rp-PSCAE-UPII-E1A-AR。

8.權利要求7所述的重組質粒載體Rp-PSCAE-UPll-E1A-AR在構建特異性重組腺病毒中的應用。