[發明專利]環介導恒溫擴增檢測肺炎衣原體的方法及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201010174440.0
• 申請日: 2010-05-10
• 公開（公告）號: CN101886122A
• 公開（公告）日: 2010-11-17
• 發明（設計）人: 孫宜峰;于丹;曾冰冰
• 申請（專利權）人: 珠海市銀科醫學工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 王賢義

1.一種環介導恒溫擴增檢測肺炎衣原體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)基因提取步驟，從待檢樣品中提取模板DNA；

(2)環介導恒溫擴增反應步驟，將上述模板DNA加入反應體系中進行擴增反應，其中所使用的引物序列如下：

F3??5-AGCCAAGCCTACTGGATC-3

B3??5-AACGAGATTGAACGCTGT-3

FIP?5-ACCACTCTGCATCGTGTAAATGTACTACTGCCGTAGATAGACC-3

BIP?5-GGCTTCATTGCCTTAAACATTTGGAGAGTTTCCTCTAATGTAACCAT-3；

(3)結果檢測步驟，選擇以下三種擴增產物檢測方法中的任意一種進行檢測：

A：將擴增產物離心目測白色沉淀來檢測結果；

B：加入顯色液觀察反應液顏色來檢測結果；

C：1.5％瓊脂糖凝膠電泳，通過電泳帶形分析檢測結果。

2.根據權利要求1所述的環介導恒溫擴增檢測肺炎農原體的方法，其特征在于，上述步驟(2)中環介導恒溫擴增反應條件為：

60～65℃????45～90分鐘；

80～95℃????3～5分鐘。

3.一種用于權利要求1所述的環介導恒溫擴增檢測肺炎衣原體的方法的

檢測試劑盒，其特征在于，包括以下成分：

成分????????????????濃度?????????????加樣量

擴增體系預混合物????2×??????????????12.5μL

引物F35～1??????????5pmol/μL????????1μL

引物B35～1??????????5pmol/μL????????1μL

引物FIP?????????????20～40pmol/μL???1μL

引物BIP?????????????20～40pmol/μL???1μL

Bst?DNA聚合酶???????8U/μL???????????1μL

雙蒸水???????????????????????????????5.5μL。

4.根據權利要求3所述的環介導恒溫擴增檢測肺炎衣原體的檢測試劑盒，其特征在于，其中擴增體系預混合物中含有2.5μL?10×ThermoPol反應緩沖液、4μL?10mmol/L?dNTP、1μL?100mmol/L硫酸鎂、5μL?5mol/L甜菜堿。