[發明專利]家蠶C-型凝集素重組表達方法及應用

無效

• 申請號: 201010173398.0
• 申請日: 2010-05-17
• 公開（公告）號: CN101864425A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 趙小凡;宋凱;王金星
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/70;C07K14/435;A23K1/16
• 代理公司: 濟南圣達專利商標事務所有限公司 37221
• 代理人: 李健康

1.一種基因重組表達家蠶C-型凝集素的生物藥物，其特征是，將家蠶C-型凝集素基因重組表達到大腸桿菌中。

2.如權利要求1所述的，所述家蠶C-型凝集素基因來自基因庫家蠶C-型凝集素基因(Accession?number：CAB38429，http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4469126)、在大腸桿菌中重組表達家蠶C-型凝集素全長基因、基因片斷、以及在上述基因的基礎上進行修飾或堿基突變產生的基因，獲得重組蛋白凝集素或凝集素功能域。

3.一種基因重組表達家蠶C-型凝集素的方法，包括如下步驟：

[1]針對插入表達載體的家蠶C-型凝集素的基因序列分別設計帶酶切位點的引物，用PCR方法擴增家蠶C-型凝集素基因；

[2]在大腸桿菌中擴增并提取表達載體-家蠶C-型凝集素基因質粒；

[3]將表達載體-家蠶C-型凝集素基因轉入宿主體內，用誘導物誘導表達；

[4]用Ni²⁺柱或其它填料純化重組表達家蠶C-型凝集素。

4.如權利要求3所述的基因重組表達家蠶C-型凝集素的方法，其特征是，步驟[3]中所述誘導物為IPTG、甲醇或其它化合物。

5.如權利要求3所述的基因重組表達家蠶C-型凝集素的方法，其特征是，步驟[1]中所述表達載體選自大腸桿菌表達載體、酵母表達載體。優選的，大腸桿菌表達載體選自pET系列載體或pGEX系列載體，酵母表達載體選自pPIC系列載體。

6.如權利要求3所述的基因重組表達家蠶C-型凝集素的方法，其特征是，步驟[1]中所述家蠶C-型凝集素為家蠶C-型凝集素基因及其基礎上進行修飾或堿基突變產生的基因。

7.如權利要求3所述的基因重組表達家蠶C-型凝集素的方法，其特征是，步驟[2]中所述大腸桿菌表達菌株為DH5α。

8.如權利要求3所述的基因重組表達家蠶C-型凝集素的方法，其特征是，步驟[3]中所述宿主為大腸桿菌、酵母菌；所述大腸桿菌，選自BL21(DE3)；所述酵母菌，選自畢赤酵母(Pichia?pastoris)。

9.如權利要求1所述的基因重組表達家蠶C-型凝集素的生物藥物的應用，其特征是，用于防治家蠶微生物感染性病害。

10.如權利要求9所述的基因重組表達家蠶C-型凝集素的生物藥物的應用，其特征是，將重組表達家蠶C-型凝集素噴灑到桑葉或添加到滅菌冷卻至37℃的人工飼料中，1mg/L，防治微生物對家蠶的感染；所述微生物選自蘇云金桿菌、綠僵菌或白僵菌。