[發(fā)明專利]一種一步檢測(cè)雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010173048.4
• 申請(qǐng)日: 2010-05-05
• 公開（公告）號(hào): CN101852802A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高亞東;凌紅麗;蔣貽海;宋新雨;魏笑笑
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島康地恩藥業(yè)有限公司;青島寶依特生物制藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 青島海昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 崔清晨

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于預(yù)防獸醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，具體是涉及一種一步檢測(cè)雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

雞新城疫(Newcastle?Disease，ND)一直是給養(yǎng)雞業(yè)帶來重大危害的疫病，被國際獸醫(yī)局(OIE)列為A類傳染病，該病對(duì)世界貿(mào)易有較大的商業(yè)影響。傳染性支氣管炎(InfectiousBrochitis，IB)是由傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的危害呼吸和泌尿生殖道的急性傳染病，雞群一經(jīng)感染，引起巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前，雞病的爆發(fā)已發(fā)生了一些新的變化，以往那種單純發(fā)生某一種疾病的情況已不多見，取而代之的是幾種疫病混合感染、病毒性疫病、隱性慢性疾病日見增多，呼吸道病的發(fā)病率超過了腸道病.這些都使雞病日趨走向復(fù)雜化，給雞病診斷與防治帶來一定的難度，特別是雞新城疫和傳染性支氣管炎，病雞的臨床癥狀有很大的差異，不同宿主對(duì)感染后的反應(yīng)也不一樣，這使診斷更為復(fù)雜和困難，單一臨床和病變不能作為診斷的依據(jù)。

對(duì)禽病毒的檢測(cè)方法，主要有病毒分離、血清學(xué)診斷以及分子生物學(xué)方法，但病毒分離時(shí)間長，要求條件高，分離率低，而采集患者急性期與恢復(fù)期雙份血清進(jìn)行抗體測(cè)定來確認(rèn)，又不能及時(shí)進(jìn)行診斷，因此，使這兩種方法在使用中受到很大的限制，而免疫金標(biāo)法(Immunochromatography?Assay)是九十年代初發(fā)展起來的，因其快速、操作簡便、試劑穩(wěn)定、可室溫儲(chǔ)運(yùn)、不易污染的特點(diǎn)得到廣泛的應(yīng)用。它是免疫親和技術(shù)、印記技術(shù)、免疫標(biāo)記技術(shù)和層析技術(shù)的組合。將包被抗體、膠體金標(biāo)記抗體固相化，與樣本吸附材料等組合在一起，制備出免疫層析診斷試條，使用時(shí)只需要把該試條下插入樣品溶液，數(shù)分鐘就可以判斷結(jié)果。與免疫滲濾法比較，穩(wěn)定性好，操作更簡便、快速，且由于為干試條形式，無需低溫保存，儲(chǔ)運(yùn)也方便，但是目前關(guān)于同時(shí)檢測(cè)雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的裝置或者其它的檢測(cè)工具未見有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種一步檢測(cè)雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條及其制備方法和應(yīng)用，能滿足現(xiàn)有技術(shù)的上述需求。

一種一步檢測(cè)雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條，有一底襯、該底襯上面的中部粘帖一包被膜，其特征在于該包被膜中部有一條包被雞新城疫病毒的抗體的檢測(cè)線、一條包被雞傳染性支氣管炎病毒的抗體的檢測(cè)線和一條包被抗鼠IgG抗體的控制線，包被膜的上面左右分別粘帖一涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜和吸水紙；涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜上面粘貼一樣品墊。

上述一步檢測(cè)雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條的制備方法，其特征在于先制備包被膜：將用包被緩沖液稀釋的雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的單克隆抗體或抗雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的多克隆抗體和抗鼠IgG抗體稀釋，并將三種抗體分別平行地噴于硝酸纖維膜的中部上，三種抗體滲入硝酸纖維膜后分別形成雞傳染性支氣管炎病毒的檢測(cè)線、雞新城疫病毒的檢測(cè)線和抗鼠IgG的控制線；再制備涂敷金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜；然后將包被膜粘貼在底襯上面的中部，在包被膜的上面左右分別粘帖一涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜和吸水紙；涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜上面粘貼一樣品墊，做成大板，切割即得膠體金試紙條。

上述一步檢測(cè)雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條在檢測(cè)雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒中的應(yīng)用。

本發(fā)明利用現(xiàn)代國際最先進(jìn)的膠體金免疫層析技術(shù)，提供一種現(xiàn)地農(nóng)戶、基層自測(cè)等用的同時(shí)檢測(cè)雞新城疫病毒和傳染性支氣管炎病毒的試紙條，該試紙條具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)，且不需使用儀器設(shè)備，成本低廉，操作簡便，能廣泛應(yīng)用于現(xiàn)地農(nóng)戶、基層及個(gè)人對(duì)于雞新城疫病毒和傳染性支氣管炎病毒的檢測(cè)。

附圖說明

附圖為本發(fā)明試紙條的縱剖結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

制備本發(fā)明的試紙條，所用的底襯1、樣品墊2和吸水紙5是本領(lǐng)域通用的部件，其余部件的制備方法如下：

一、包被膜4的制備：

1.抗體的細(xì)胞株制備

①新城疫病毒的單克隆抗體細(xì)胞株的制備和檢定

慢慢攪動(dòng)含有新城疫病毒的雞胚尿囊液，并加入氯化鈉，使其終濃度為0.5mol/L，再加入10％(重量百分?jǐn)?shù)，下同)的聚乙二醇6000(PEG6000)，4℃過夜，以8000r/min離心30分鐘，收集病毒沉淀，將病毒沉淀用磷酸鹽緩沖液(PBS)溶解，4℃過夜，以10000r/min離心1小時(shí)，所得沉淀即為濃縮的病毒，儲(chǔ)存在-20℃低溫冰箱中備用。