[發明專利]一種蘭科植物試管內授粉及結實的方法

無效

• 申請號: 201010172180.3
• 申請日: 2010-05-13
• 公開（公告）號: CN102239801A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 田敏;王彩霞;歐陽彤
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院亞熱帶林業研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種組織培養方法，尤其涉及一種蘭科植物試管內授粉及結實的方法。

背景技術

蘭科植物(蘭花)具有巨大的經濟價值，是世界花卉業的重要組成部分，同時許多種類還具有很高的藥用價值。其中常用的無性繁殖方法是分株擴繁，用種子繁殖的育種周期長，一般需要4-5年。而且，一般地，蘭花的新品種培育工作需要進行反復的雜交、回交和自交，才能實現育種目的，選育出優良的新品種。采用常規辦法，這一育種過程一般要用十幾年時間。而蘭花的試管內開花、授粉及結實可很好地解決這一問題。有了促使蘭花試管內開花及人工授粉的方法，人們就可以在試管內讓子一代開花，并且在試管內進行自交授粉或子一代植株之間相互授粉，培養出種子。這些種子無需消毒直接播種于培養基上，獲得子二代，再誘導出花，即可從子二代中間選擇想要的品種。這一過程比常規方法，至少可以節省兩個從瓶苗到開花的栽培周期。這是一個全新的應用研究領域，對于蘭花的產業化生產具有重要的意義。目前，國內外關于石斛蘭、寒蘭、建蘭、春蘭等的試管開花有過報道，但一般僅限于對試管內開花的調控，而對試管內開花的花朵進行人工授粉，并培育子代的報道極少。

發明內容

本發明的目的在于針對蘭花常規育種周期長的問題，提供一套離體培養中調控植物開花、人工授粉及育性種子產生的方法，此技術可有效地縮短育種周期，提高育種效率。

為了實現上述發明目的，本發明采用如下技術方案：

一種蘭科植物試管內授粉及結實的方法，包括如下步驟：

(1)將成熟的蘭科植物果實經清洗、消毒后剖開，取蒴果內種子撒在MS培養基上進行培養；

(2)待培養形成可見的小苗后，將小苗轉移至MS+0.5mg·L^-16-BA+0.1mg·L^-1NAA的培養基上進行繼代培養，60天后獲得組培苗；

(3)將組培苗移到MS+0.5mg·L^-16-BA+0.05mg·L^-1TDZ+0.1mg·L^-1NAA+10％椰子水+500mg·L^-1酵母液+50mg·L^-1VC的培養基上進行培養，可誘導產生具有較多花芽的花序，將具有花序的組培苗再轉入MS+10％椰子水+500mg·L^-1酵母液+50mg·L^-1VC的無激素培養基上，花芽可正常開花，花完全開放后3-4天，用鑷子取出花中的花粉塊，進行自花授粉或異花授粉；

(4)將人工授粉后的試管苗重新放回培養室中培養，培養后獲得子一代果實，再行無菌播種，即可得到子二代植株。

步驟(1)中的消毒過程為用體積比為75％乙醇表面消毒30秒，無菌水沖洗2遍，用重量比為0.1％的HgCl₂中浸泡15-20分鐘，無菌水沖洗3-4次。

步驟(1)培養溫度為25±2℃，光照光強為2500～3000Lx，光照時間為12h/d。

上述所有的操作均處于無菌環境下進行。

所述的蘭科植物優選為鐵皮石斛。

本發明有效地縮短了蘭科植物尤其是鐵皮石斛的育種周期，可將自然狀態下4-5年的育種周期縮短到1年之內，培養時間短，成本低，有利于縮短蘭花的育種周期，提高育種效率。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發明做進一步的說明。

實施例：本實施例以蘭科植物鐵皮石斛為例，來說明蘭科植物試管內授粉及結實的方法，但本發明并不為實施例所限。

材料為鐵皮石斛成熟而未開裂的蒴果。將采回來的果子去除果柄，用自來水沖洗干凈，然后在無菌超凈工作臺上用體積比為75％乙醇表面消毒30秒，無菌水沖洗2遍，用重量比為0.1％的HgCl₂中浸泡15-20分鐘，無菌水沖洗3-4遍。將洗凈的蒴果置滅菌濾紙上吸干水分。在超凈工作臺上用無菌解剖刀將蒴果的前后兩端各1cm處切下，中間段縱向切開，將蒴果內干燥的粉末狀的種子均勻撒在MS培養基上。培養溫度為25±2℃，光照光強為2500～3000Lx，光照時間為12h/d。

10d后部分種胚開始膨大、變綠，20d后少量種胚開始形成綠色的原球莖，30d后形成大量的原球莖，并且開始出現葉、根的分化。60d后形成可見的小苗。將小苗轉移到MS+0.5mg·L^-16-BA+0.1mg·L^-1NAA的培養基上進行繼代培養，60d后可獲得大量完整的長約4-5cm的組培苗。