[發明專利]乙型肝炎病毒前S1抗原的檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201010171906.1
• 申請日: 2010-05-14
• 公開（公告）號: CN102243236A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 藺皓
• 申請（專利權）人: 中生方政生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576;G01N33/543;G01N21/31
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊;李玉秋

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種乙型肝炎病毒前S?1抗原的檢測試劑盒。

背景技術

乙型肝炎病毒前S1抗原(HBV-PreS1)，簡稱前S1抗原，存在于完整的乙型肝炎病毒Dane顆粒表面，是乙肝病毒外膜蛋白的重要組成部分，參與乙肝病毒的組裝、分泌，還可識別肝細胞膜上特異性受體。在正常人的肝細胞膜上存在HBV?PreS1受體，當血液循環中存在完整乙肝病毒顆粒時，乙肝病毒顆粒可通過其表面的PreS1與肝細胞膜上存在的HBV?PreS1受體結合，進而附著并入侵肝細胞。

乙型肝炎病毒乙型病毒性肝炎是一種易慢性化、重癥化的傳染病。隨著近幾年對前S1抗原研究的深入，發現前S1抗原是乙型肝炎病毒感染和復制的重要的血清學標志。前S1抗原與HBV?DNA在反映病毒復制方面有良好的一致性。對于HBeAg陰性的慢性乙型病毒性肝炎，前S1抗原的持續陽性，常提示病情呈持續進展及易重癥化。前S1抗原滴度的持續下降提示干擾素抗病毒治療的預期療效好。因此前S1抗原可作為病毒和復制的重要輔助指標，其滴度的大小在一定程度上反映了病毒復制性與傳染性的強弱。

發明內容

本發明的發明目的是提供一種檢測乙型肝炎病毒前S1抗原的試劑盒。所述試劑盒特異性與靈敏度高，穩定性好，變異系數小于15％。

為了實現上述發明目的，本發明采用以下技術方案：

一種乙型肝炎病毒前S1抗原的檢測試劑盒，包括：

(a)、抗-PreS1抗體；

(b)、酶標抗HBs抗體；

(c)、洗滌液；

(d)、稀釋液；

(e)、包被液；

(f)、封閉液；

(g)、顯色液；

(h)、終止液。

作為優選，本發明所述試劑盒還包括陰性對照、陽性對照以及對照品稀釋液。

作為優選，所述包被液為含Na₂CO₃?1.59g/L、NaHCO₃2.93g/L的0.05mol/L、pH?9.6碳酸鹽緩沖液。

作為優選，所述封閉液為含1％BSA、8.0g/L?NaCl、0.2g/L?KH₂PO₄、2.9g/L?Na₂HPO₄·12H₂O、0.2g/L?KCl、50g/L蔗糖的0.01M、pH7.4磷酸鹽緩沖液。

作為優選，所述稀釋液為含20％BSA、8.0g/L?NaCl、0.2g/L?KH₂PO₄、2.9g/L?Na₂HPO₄·12H₂O、0.2g/L?KCl、0.03％的Proclin300，適量胭脂紅的0.01M、pH7.4的磷酸鹽緩沖液。

作為優選，所述酶標抗HBs抗體為辣根過氧化物酶標記的抗HBs抗體。

作為優選，所述顯色液為含0.40g/LTMB、1.5g/L保護劑B的pH3.0的檸檬酸磷酸鹽緩沖液。

作為優選，所述底物液為含6.084g/L?NaH₂PO₄、21.848g/LNa₂HPO₄·12H₂O、0.6585g/L過氧化脲、0.5734g/L保護劑A的混合溶液。

作為優選，所述終止液為2mol/L?H₂SO₄溶液。

作為優選，所述對照品稀釋液為含8.0g/LnaC1、0.2g/L的KH₂PO₄、2.9g/L的Na₂HPO₄·12H₂O、0.2g/L的KCl3％牛血清白蛋白、pH為7.4的溶液。

本發明應用雙抗體夾心法原理，利用抗-PreS1抗體制備包被板，以辣根過氧化物酶標記的抗-HBs抗體作為酶標抗體，通過免疫反應形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，該復合物中的HRP酶可催化底物顯色，顯色強度與乙型肝炎病毒前S1抗原的含量成正比，對人血清或血漿中的乙型肝炎病毒前S1抗原進行定性檢測。

本發明所述試劑盒適用于半自動或全自動板式酶標儀進行檢測，具體使用過程如下：

a、包被、洗板：將抗-PreS1抗體加至酶聯板孔內孵育過夜，采用洗滌液洗滌加樣孔；