[發明專利]腸道病毒71型抗原檢測試紙條(膠體金法)

無效

• 申請號: 201010171871.1
• 申請日: 2010-05-14
• 公開（公告）號: CN102243237A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 常延濱;郭四新
• 申請（專利權）人: 北京貝爾生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種腸道病毒71型抗原檢測試紙條，其特征在于有一底襯(1)、該底襯(1)上面的中部粘貼一層析膜(4)，該層析膜(4)中部有一條包被抗EV71抗原VP1單克隆抗體的檢測線(6)和一條包被羊抗兔IgG抗體的質控線(7)，層析膜(4)的左右兩端分別粘貼一涂覆有金標記兔抗EV71病毒抗原多克隆抗體的玻璃纖維膜為膠體金墊(3)和吸水紙(5)，膠體金墊(3)在檢測線(6)一側，吸水紙(5)在質控線(7)一側；膠體金墊(3)的下端上面粘貼一樣品墊(2)。

2.根據權利要求1所述的一種腸道病毒71型抗原檢測試紙條的制備方法，其特征在于該方法包括膠體金墊(3)和層析膜(4)包被的檢測線(6)和控制線(7)的制備及劑試紙條的組裝。

3.如權利要求2所述的腸道病毒71型抗原檢測試紙條的制備方法，其特征在于所述的金標記兔抗EV71病毒抗原多克隆抗體的金標墊(3)的制備。

3.1.金標抗體的制備

3.1.1膠體金的制備：采用公知的檸檬酸三鈉還原法，得到粒徑在40納米左右的膠體金顆粒。

3.1.2EV71病毒多克隆抗體制備：用細胞培養EV71裂解物純化(由CDC病毒病所提供)后多次免疫新西蘭大白兔，ELISA檢測效價大于1∶20000時收集兔血，4℃過夜取血清，經Protein?A柱親和層析純化后，得到成品兔抗EV71病毒多克隆抗體。

3.1.3金標抗體的制備：在100ml膠體金溶液中加入3.1.2制備的多抗1-5mg；再加入10％的氯化鈉溶液10ml，低速離心去除沉淀；上清高速離心后，得沉淀物溶于PH7.2的PBS緩沖液中，上凝膠層析柱收集活性峰得到成品金標抗體原液。

3.2將3.1.3制備的金標抗體原液溶于PH7.2的Tris-HCL緩沖液中，含0.1％BSA和0.02％的疊氮鈉，調整到吸光度A530為80，得到金標抗體工作液，用噴膜機將金標抗體工作液噴涂到玻璃纖維膜上，然后在37℃下干燥得金標墊(3)。

4.如權利要求2所述的腸道病毒71型抗原檢測試紙條的制備方法，其特征在于所述的底襯上層析膜(4)上的檢測線(6)和質控線(7)的制備，將抗EV71抗原VP1單克隆抗體和羊抗兔多抗分別配制成包被液，用噴膜機噴涂在層析膜(4)上形成檢測線(6)和質控線(7)，放置于37℃干燥箱(相對濕度小于45％)2小時，然后放入有干燥劑的鋁箔袋中封口，保存于2～8℃環境備用。