[發明專利]一種越橘治療呼吸道系統疾病有效部位的質量控制方法

有效

• 申請號: 201010171090.2
• 申請日: 2010-05-13
• 公開（公告）號: CN101843650A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 王喜軍;陳曦;吳修紅;孫暉
• 申請（專利權）人: 王喜軍;陳曦;吳修紅
• 主分類號: A61K36/45
• 分類號: A61K36/45;A61P11/00;G01N30/90;G01N30/02;G01N21/31;A61K127/00;A61K135/00
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技術領域

本發明涉及天然藥物的質量控制領域，具體涉及一種越橘提取物的質量控制方法。

技術背景

越橘提取物是從杜鵑花科植物越橘Vaccinium?vitis-idaea?L的莖、葉按照我們前期申請的中國專利中所公開的提取方法制得的提取物：申請號為200310107623.0、名稱為“越橘治療呼吸道疾病的有效部位及其制備方法”。該提取物主要包括酚苷類和黃酮類，其中酚苷部位主要包含熊果苷、甲基熊果苷、2-O-咖啡酰基熊果苷及其衍生物等；黃酮部位主要包含金絲桃苷、異槲皮苷、匾蓄苷、蘆丁、槲皮素及其衍生物等。酚苷類成分為總提取物的45-65％(w/w)，黃酮類成分類成分為總提取物的5-20％(w/w)。

我們對熊果苷的生物活性進行研究，通過抗炎(醋酸致腹膜炎法)、止咳(氨水引咳法)、祛痰(氣管酚紅排泌法)實驗表明：熊果苷和越橘乙醇提取物均有顯著的抗炎、祛痰和鎮咳作用；越橘總黃酮具有較好的抗菌、抗病毒作用。通過實驗證明：越橘總黃酮對白喉桿菌的抗菌作用最強，對金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌、鏈球菌(A群)也具有顯著作用。越橘總黃酮對感染流感病毒的小鼠有很明顯的延長疾病潛伏期及增加存活時間的作用。越橘中所含的金絲桃苷具有抗炎、止咳、祛痰的作用；異槲皮素具有降壓、抗炎、平喘、降血脂作用；蘆丁具有抗炎、抗病毒作用。因此越橘提取物中的酚苷類和黃酮類都是其治療呼吸道疾病的有效部位。

基于熊果苷、總黃酮和金絲桃苷的藥理活性與越橘提取物活性基本一致，因此在質控中選擇熊果苷、總黃酮以及總黃酮中的金絲桃苷作為越橘提取物中的定量檢測物質具有非常重要意義，而熊果苷和總黃酮的含量也成為越橘提取物作為原料制劑療效保證的重要指標。

越橘提取物是我們自主研制的，目前在分析領域文獻報道中，尚無與越橘提取物質控的相關內容。為保證制劑所需原料的質量穩定可控，建立越橘提取物的質量控制方法具有很大的意義。

發明內容

由于越橘提取物有兩部分成分組成，即以熊果苷為主的酚苷類和以金絲桃苷為主的黃酮類成分組成，因此如何質控提取物中兩種有效部位具有較高的難度。本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供一種可控制提取物質量、保證制劑安全的越橘提取物制劑的質量控制方法。

本發明是這樣實現的：

按照天然藥物質量標準研究要求，對越橘的活性提取物進行了全面的質量研究。

(1)本品性狀為棕褐色干浸膏；氣微，味苦。

(2)鑒別方法為薄層色譜法：以氯仿(6～9分)-甲醇(1～3份)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液后，晾干，100～110℃烘至斑點顯色清晰。供試品溶液、對照品溶液各2ul，點于同一硅膠G薄層板上，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

其中對照品溶液配制方法為：熊果苷對照品適量用乙醇制成1ml含1mg的溶液；

其中供試品溶液配制方法為：取本品粉末2g，加入甲醇5ml，超聲使完全溶解，溶液作為供試品溶液。

(3)檢查項內容包括水分、熾灼殘渣、重金屬、砷鹽檢查，按照中國藥典2005年版一部附錄要求的方法測定；

(4)熊果苷含量測定包括以下步驟：分別制備供試品溶液和對照品溶液，用高效液相色譜法測定，其特征是：

色譜條件為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(13～18∶87～82)溶液為流動相；流速0.8～1.0ml/min；檢測波長為278～285nm；進樣量20ul。理論板數按熊果苷峰計算，不低于2000。

其中對照品溶液的制備方法為：精密稱取熊果苷對照品適量，加乙醇制成每1ml含40～80μg的溶液，即得。

其中供試品溶液的制備方法為：取越橘提取物粉術80～120mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，經0.45um微孔濾膜過濾，即得。

(5)總黃酮的測定包括以下步驟：分別制備供試品溶液和對照品溶液，500～520nm波長處測定吸收度。

其中對照品溶液的制備方法為：取金絲桃苷對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1ml含金絲桃苷165～215μg的溶液，搖勻。分別精密吸取對照品液3.0ml，完全轉移至25ml容量瓶中，再加水3.0ml；然后加入0.3～0.7％亞硝酸鈉溶液1ml，放置6分鐘；再加入8～12％硝酸鋁1ml，放置5～10分鐘；加入9～11％氫氧化鈉10ml，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，放置10～20分鐘。